反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 100-140 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
人
使用对人 CD6 蛋白的氨基末端具有特异性的重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
T 细胞分化抗原 CD6 是一种在未成熟胸腺细胞和成熟 T 细胞中表达的细胞黏附分子,并且还可在免疫系统内的部分 B 细胞和自然杀伤细胞中检测到 (1-4)。CD6 通过其结合伴侣 CD166/ALCAM 介导细胞间相互作用 (2),并促进免疫突触的形成和成熟 (3,4)。CD6 可作为一个共刺激受体,它通过 TCR/CD3 复合体信号转导级联促进 T 细胞激活和增殖 (3-6)。研究表明,CD6 可以在丝氨酸残基和苏氨酸残基上糖基化 (7) 与过度磷酸化 (8),并且在酪氨酸残基上磷酸化 (6,9),前述每种情况都可能差异性影响这个分子的功能和信号转导。CD6 还可作为一个不依赖于钙离子形式的受体,可结合和聚合革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。在脂多糖刺激下,CD6 介导炎症反应的激活和促炎性细胞因子的分泌 (10)。
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