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72031
CD57 (HNK-1) Mouse mAb
一抗
单克隆抗体

CD57 (HNK-1) Mouse mAb #72031

引用 (1)
筛选器:
  1. IHC
  2. IF
Immunohistochemistry Image 1: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人 T 细胞淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 1: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的 CD56+ 人外周血单个核细胞沉淀物(左图,阳性)、TT 细胞沉淀物(中图,阳性)或 Hep G2 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人肾细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人 B 细胞非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人前列腺腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 5: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人脾脏细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 6: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
使用 CD57 (HNK-1) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人扁桃体细胞进行免疫组织化学分析。
Immunofluorescence Image 1: CD57 (HNK-1) Mouse mAb
使用山羊抗小鼠 IgM(Alexa Fluor ® 488)二抗所检测的 CD57 (HNK-1) Mouse mAb(绿色)对 TT 细胞(左图,阳性)或 Hep G2 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样品用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961)封装。
To Purchase # 72031S
目录# 规格 价格 库存
72031S
100 µl

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 小鼠 IgM

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
IHC Leica BOND 1:400 - 1:1600
免疫组织化学(石蜡) 1:100 - 1:400
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:800 - 1:3200

保存

保存在 10 mM PBS 中,包含 0.05% BSA 和 0.05% 叠氮化钠。保存在 -20°C 时,可保持稳定 36 个月。此产品将在 -20°C 下冷冻,因此建议分装到一次性小瓶中,以避免多次冷冻/解冻循环。 可能存在少量沉淀物,但不会干扰抗体性能。

实验步骤

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免疫组织化学法 (Leica®BOND™)

:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。

  步骤 试剂 时间/温度
1 脱蜡 BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution 预编程的 Leica® BOND™ 
2 抗原修复  BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 HIER 20 分钟
3 过氧化物封闭液 Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* 5 分钟
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 0:00 分钟
4 蛋白封闭液(可选) #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution   20 分钟 
5 一抗^ 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 30 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
6 Post Primary Mouse Linker Polymer Refine Detection Kit Post Primary*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
7 二次检测 Polymer Refine Detection Kit Polymer*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution/Deionized Water 定制(参见下文)
8a 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  0:00 分钟 
8b 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  10 分钟 
  洗涤 去离子水 3x 0:00 分钟
9 复染 Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin*  5 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  0:00 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
10 脱水(离线):    
  在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。  
  在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
  在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
11 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。  
       
  可选订制洗涤: BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 0:00
    去离子水 0:00

*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂

LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。

发布​时间 2018 年 8 月

修订时间 2018 年 9 月

实验步骤编号:1445

免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112)。
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Mouse #8125)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 让 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 按需在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926
兼容的
色原
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986  
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644  

注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​时间 2010 年 2 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:280

免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液与试剂

若想获得高质量的免疫荧光图片,请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液:(1X PBS / 5% 常规血清/ 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清(例如 Normal Goat Serum (#5425) 添加至 9 ml 1X PBS)并充分混合。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. 建议使用荧光物质标记的 Anti-Mouse 二抗:

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后,室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号:148

特异性/灵敏度

CD57 (HNK-1) Mouse mAb 可 识别 B3GAT1 蛋白酶产生的 CD57 碳水化合物修饰。

物种反应性:

来源/纯化

使用 HSB-2 细胞的膜抗原对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

CD57 抗原(也称为 HNK-1 和 Leu7),是在细胞表面的各种蛋白质、脂质和硫酸软骨素蛋白聚糖上表达的末端硫酸化聚糖碳水化合物表位(糖表位)(1,2)。CD57 由酶 B3GAT1 合成,存在于外周血淋巴细胞的子集中,包括 NK 细胞和 CD8+ T 细胞以及神经细胞和横纹肌(3-5)。研究表明,CD57 在血小板、单核细胞、粒细胞或红细胞上不表达 (6)。CD57 表位可能在神经细胞粘附中起作用(7),并表征 T 细胞和NK细胞的独特成熟状态(8,9)。CD57 是研究自身免疫性疾病、传染病和癌症患者中功能性免疫缺陷的重要标志物 (1)。

有限使用

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