反应性 | M |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 70 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 - 1:800 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
小鼠
使用与小鼠 CD5 蛋白的 Pro95 周围残基相对应的合成肽,对动物免疫接种来产生单克隆抗体。
CD5 是一种 I 型跨膜蛋白,属于清道夫受体半胱氨酸富集 (SRCR) 家族,特征是存在至少一个含 90-110 个氨基酸的 SRCR 结构域。CD5 在所有成熟 T 细胞、成熟 B 细胞的 B-1a 亚群和某些白血病 B 细胞中表达。它在调节性 T 和 B 细胞 (Tregs/Bregs) 中表达升高。无能 T 和 B 细胞中的 CD5 表达也升高。还在许多自身免疫疾病中发现 CD5 水平升高 (1-3)。CD5 结合 T 细胞受体 (TCR),并且负调控 T 细胞激活和分化。肿瘤浸润性 T 淋巴细胞中的 CD5 表达与它们的抗肿瘤活性呈负相关 (4-6)。最近,有报道称 CD5 直接结合 IL6,并介导下游信号转导。CD5+ B 细胞会促进动物模型中的肿瘤生长 (7)。现已积极探索靶向 CD5 的试剂是否可用作癌症和其他病情的治疗性干预措施 (8,9)。
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