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39037
CD44 (IM7) Rat mAb
一抗
单克隆抗体
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CD44 (IM7) Rat mAb #39037

引用 (2)
筛选器：
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: CD44 (IM7) Rat mAb
使用 CD44 (IM7) Rat mAb（绿色）和 GFAP (GA5) Mouse mAb #3670（红色）对野生型小鼠大脑（左图）或阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的大脑（右图）进行共聚焦免疫荧光平铺扫描。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。插图 A 和 B 在后续图中的分辨率更高。
Immunofluorescence Image 2: CD44 (IM7) Rat mAb
插图 A：使用 CD44 (IM7) Rat mAb（绿色）和 GFAP (GA5) Mouse mAb #3670（红色）对野生型小鼠大脑（左图）或阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的大脑（右图）进行分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
Immunofluorescence Image 3: CD44 (IM7) Rat mAb
插图 B：使用 CD44 (IM7) Rat mAb（绿色）和 GFAP (GA5) Mouse mAb #3670（红色）野生型小鼠大脑（左图）或阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的大脑（右图）进行分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
Immunofluorescence Image 1: CD44 (IM7) Rat mAb
使用 CD44 (IM7) Rat mAb（绿色）对 C2C12 细胞（左图，阳性）或 Neuro-2a 细胞（右图，阴性）进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
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定制制剂

支持性数据

反应性 M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 大鼠 IgG2b、kappa

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法（冰冻） 1:50 - 1:200
免疫荧光法（免疫细胞化学） 1:50 - 1:200

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。该产品在 -20C 下可稳定保存 36 个月。不要分装抗体。

实验步骤

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免疫荧光法（冰冻）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液：（1X PBS / 5% 常规血清/ 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清（例如 Normal Goat Serum (#5425) 添加至 9.5 ml 1X PBS）并充分混合。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液： (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (#9998)，并混合。

  5. 建议的荧光染料标记抗大鼠二抗：

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色（C 部分）。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织，请立刻按下列步骤固定：

    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意：甲醛有毒性，仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次，每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时，按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例，在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后，室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2016 年 7 月

实验步骤编号：152

免疫荧光法（免疫细胞化学）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液（1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，将 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清（如 Normal Goat Serum (#5425)添加至 9 ml 1X PBS） 并充分混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，将 30 µl Triton™ X-100 添加至 10 ml 1X PBS 。充分混合后，添加 0.1 g BSA (9998)，并混合。

  5. 建议的荧光染料标记抗大鼠二抗：

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体，随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意：甲醛有毒性，需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液，用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时，按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后，室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号：149

特异性/灵敏度

CD44 (IM7) Rat mAb 可检测 CD44 总蛋白的内源水平。该抗体可检测细胞外结构域内的表位，并且预计可检测所有 CD44 同工型。除小鼠反应性外，流式细胞分析显示该克隆还对人样品呈阳性。

物种反应性：

小鼠

来源/纯化

通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。

背景

CD44 是 I 型跨膜糖蛋白，可通过对透明质酸 (HA) 的亲和力并可能通过胞外基质 (ECM) 的其他部分，介导细胞-细胞相互作用和细胞-基质相互作用。CD44 呈高度多态性，具有多种选择性剪切变体， 经受广泛的翻译后修饰 (1,2)。CD44 的表面水平升高是 T 细胞活化的特征，并且该蛋白质的表达在炎症反应期间上调。研究已经证实， CD44 和 HER2 之间的相互作用与卵巢癌细胞生长的增长相关 (1-3)。CD44 与埃兹蛋白、根蛋白和膜突蛋白 (ERM) 相互作用，使肌动蛋白细胞骨架与质膜和 ECM 连接 (4-6)。在静息细胞中，CD44 在 Ser325 处组成型磷酸化。PKC 的激活导致 Ser291 磷酸化、Ser325 去磷酸化、埃兹蛋白从 CD44 解离和定向运动性 (4)。
  1. Goodison, S. et al. (1999) Mol. Pathol. 52, 189-196.
  2. Cichy, J. and Puré, E. (2003) J. Cell Biol. 161, 839-843.
  3. Bourguignon, L.Y. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272, 27913-27918.
  4. Legg, J.W. et al. (2002) Nat. Cell Biol. 4, 399-407.
  5. Yonemura, S. et al. (1998) J. Cell Biol. 140, 885-895.
  6. Tsukita, S. et al. (1994) J. Cell Biol. 126, 391-401.

通路与蛋白质

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