反应性 | H M |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 18 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人, 小鼠
使用与人 CD3ζ 蛋白的羧基末端周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过肽亲和色谱纯化抗体。
当 T 细胞经 T 细胞受体 (TCR) 遭遇抗原时,抗原数量和性质信息将中继至胞内信号转导装置 (1)。该激活过程主要取决于直接与 TCR 结合的多亚基蛋白质复合体 CD3(分化抗原簇 3)。CD3 由四种多肽组成:ζ、γ、ε 和 δ。这些多肽各自含有至少一个基于免疫受体酪氨酸的激活基序 (ITAM) (2)。TCR 复合体与外来抗原的接合在 ITAM 基序中诱导酪氨酸磷酸化,并且磷酸化的 ITAM 作为信号转导分子(如 ZAP-70 和 PI-3 激酶的 p85 亚基)的对接位点发挥作用 (3,4)。TCR 连接还在 CD3ε 中诱导构象变化,从而一个脯氨酸区暴露并且随后与接头蛋白 Nck 缔合 (5)。
CD3ζ 不变链是一种 I 型跨膜蛋白,作为一种二硫键连接的同型二聚体存在于 TCR 信号转导复合体中 (6)。每个 CD3ζ 单体的细胞浆尾区含三个不同的 ITAM 基序,每个 ITAM 基序含两个酪氨酸残基。CD3ζ ITAM 酪氨酸残基(包括 Y142)的磷酸化是由于 Lck 和 Fyn 酪氨酸激酶被募集到 TCR 引起的 (7)。Lck/Fyn 介导的 ITAM 磷酸化会生成能够促进 ZAP-70 发生 SH2 结构域依赖型募集和激活的停靠位点 (8-10),这会促进 TCR 下游信号转导活动扩增,从而促进 T 细胞激活 (10)。较多 p16 CD3ζ 的磷酸化会产生 ITAM 磷酸化程度存在差异的 p21 和 p23 物种。现已提出 P21/p23 比值有助于调节 T 细胞激活的程度 (11)。CD3ζ 在 TCR 复合体的组装和表面表达中起到重要作用。确实,有研究表明,CD3ζ 在发生 Ag 依赖型 TCR 刺激时出现降解,这是紧密调控 T 细胞激活的一种机制 (12)。
探索与本品相关的通路。
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