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74332
CD20 (L26) Mouse mAb
一抗
单克隆抗体

CD20 (L26) Mouse mAb #74332

引用 (0)
筛选器:
  1. IHC
Immunohistochemistry Image 1: CD20 (L26) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人食道腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: CD20 (L26) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: CD20 (L26) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人肝细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: CD20 (L26) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人胃腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 1: CD20 (L26) Mouse mAb
使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常恒河猴脾脏进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: CD20 (L26) Mouse mAb
使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人乳腺导管癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: CD20 (L26) Mouse mAb
使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的 Raji 细胞沉淀物(左图,阳性)或 Jurkat 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: CD20 (L26) Mouse mAb
使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 5: CD20 (L26) Mouse mAb
使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 6: CD20 (L26) Mouse mAb
使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人肺腺癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 7: CD20 (L26) Mouse mAb
使用 CD20 (L26) Mouse mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
To Purchase # 74332S
目录# 规格 价格 库存
74332S
100 µl

支持性数据

反应性 H Mk
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 Mouse IgG2a kappa

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
IHC Leica BOND 1:4000 - 1:16000
免疫组织化学(石蜡) 1:2000 - 1:8000

保存

保存在 10 mM PBS 中,包含 0.05% BSA 和 0.05% 叠氮化钠。保存在 -20°C 时,可保持稳定 36 个月。此产品将在 -20°C 下冷冻,因此建议分装到一次性小瓶中,以避免多次冷冻/解冻循环。 可能存在少量沉淀物,但不会干扰抗体性能。

实验步骤

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免疫组织化学法 (Leica®BOND™)

:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。

  步骤 试剂 时间/温度
1 脱蜡 BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution 预编程的 Leica® BOND™ 
2 抗原修复  BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 HIER 20 分钟
3 过氧化物封闭液 Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* 5 分钟
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 0:00 分钟
4 蛋白封闭液(可选) #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution   20 分钟 
5 一抗^ 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 30 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
6 Post Primary Mouse Linker Polymer Refine Detection Kit Post Primary*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
7 二次检测 Polymer Refine Detection Kit Polymer*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution/Deionized Water 定制(参见下文)
8a 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  0:00 分钟 
8b 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  10 分钟 
  洗涤 去离子水 3x 0:00 分钟
9 复染 Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin*  5 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  0:00 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
10 脱水(离线):    
  在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。  
  在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
  在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
11 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。  
       
  可选订制洗涤: BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 0:00
    去离子水 0:00

*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂

LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。

发布​时间 2018 年 8 月

修订时间 2018 年 9 月

实验步骤编号:1445

免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112)。
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Mouse #8125)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 让 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 按需在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926
兼容的
色原
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986  
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644  

注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​时间 2010 年 2 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:280

特异性/灵敏度

CD20 (L26) Mouse mAb 可检测 CD20 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 猴

来源/纯化

使用人扁桃体 B 细胞对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

B 淋巴细胞抗原 CD20(也称为 MS4A1;跨膜结构域 4 亚家族 A 成员 1)是参与调节 B 细胞激活和增殖的细胞表面磷酸化蛋白 (1,2)。它通常用作识别 B 细胞的标志物,在整个 B 细胞发育过程中表达,直到它们分化成为浆细胞。CD20 没有已知配体,其表达和功能在人和小鼠之间很大程度上保守 (1-3)。有证据表明,CD20 对于钙池调控钙离子通道 (SOC) 进入是必要的,这将导致 B 细胞激活所需的细胞质钙水平升高 (4,5)。抗 CD20 抗体免疫疗法通过激活天然单核细胞网来消耗 B 细胞,是 B 细胞淋巴瘤、白血病和自身免疫性疾病和常用疗法 (6)。
  1. Stashenko, P. et al. (1980) J Immunol 125, 1678-85.
  2. Tedder, T.F. et al. (1985) J Immunol 135, 973-9.
  3. Tedder, T.F. et al. (1988) J Immunol 141, 4388-94.
  4. Bubien, J.K. et al. (1993) J Cell Biol 121, 1121-32.
  5. Li, H. et al. (2003) J Biol Chem 278, 42427-34.
  6. Uchida, J. et al. (2004) J Exp Med 199, 1659-69.

限制使用

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