反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 小鼠 IgG2a |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
IHC Leica BOND | 1:200 - 1:800 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 - 1:800 |
注:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。
步骤 | 试剂 | 时间/温度 | |
---|---|---|---|
1 | 脱蜡 | BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution | 预编程的 Leica® BOND™ |
2 | 抗原修复 | BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution | 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 HIER 20 分钟 |
3 | 过氧化物封闭液 | Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* | 5 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 0:00 分钟 | |
4 | 蛋白封闭液(可选) | #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution | 20 分钟 |
5 | 一抗^ | 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 | 30 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
6 | Post Primary Mouse Linker | Polymer Refine Detection Kit Post Primary* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
7 | 二次检测 | Polymer Refine Detection Kit Polymer* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution/Deionized Water | 定制(参见下文) | |
8a | 可视化 | Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 0:00 分钟 |
8b | 可视化 | Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 10 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 3x 0:00 分钟 | |
9 | 复染 | Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin* | 5 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 0:00 分钟 | |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
10 | 脱水(离线): | ||
在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。 | |||
在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
11 | 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。 | ||
可选订制洗涤: | BOND™ Wash Solution | 2:00 | |
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 2:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 0:00 | ||
去离子水 | 0:00 |
*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂
LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。
BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。
发布时间 2018 年 8 月
修订时间 2018 年 9 月
实验步骤编号:1445
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:280
人
使用与 CD16 蛋白外部结构域相对应的原核重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体,这对跨膜形式和 GPI 连接形式都是通用的。
CD64 (FcgammaRI)、CD32 (FcgammaRII) 和 CD16 (FcgammaRIII) 是免疫球蛋白超家族的三大类。CD64 对含有三个 Ig 样结构域的 IgG 具有较高的亲和性,而 CD32 和 CD16 与具有两个 Ig 样结构域的 IgG 具有较低的亲和性。两种基因编码 CD16-A 和 CD16-B,导致它们仅在胞外域中存在 6 氨基酸差异。但 CD16-A 具有一个跨膜锚点,而 CD16-B 则具有一个糖基磷脂酰肌醇 (1)。CD64、CD32 和 CD16 是膜糖蛋白,在所有免疫活性细胞中表达,并且可引发不同的免疫功能(激活 B 细胞、吞噬作用、抗体依赖性细胞毒性、免疫复合体清除以及抗原呈递增强)(2)。CD16 交联会诱导 NK 细胞中 Lck 的酪氨酸磷酸化 (Tyr394) (3)。与 CD16 相对比的 CD32 在胞质域中具有酪氨酸激活基序,可结合加工这些基序的分子 (1)。
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