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88251
CD16 (2H7) Mouse mAb
一抗
单克隆抗体

CD16 (2H7) Mouse mAb #88251

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筛选器:
  1. IHC
Immunohistochemistry Image 1: CD16 (2H7) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD16 (2H7) Mouse mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: CD16 (2H7) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD16 (2H7) Mouse mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: CD16 (2H7) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx 上使用 CD16 (2H7) Mouse mAb 对石蜡包埋的人肝细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: CD16 (2H7) Mouse mAb
在 Leica® BOND Rx上使用 CD16 (2H7) Mouse mAb 对石蜡包埋的人肺腺癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 1: CD16 (2H7) Mouse mAb
使用 CD16 (2H7) Mouse mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: CD16 (2H7) Mouse mAb
使用 CD16 (2H7) Mouse mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性腺癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: CD16 (2H7) Mouse mAb
以浓度匹配的 Mouse (E5Y6Q) mAb IgG2a Isotype Control #61656(右图)作为对照,使用 CD16 (2H7) Mouse mAb(左图)对石蜡包埋的正常人脾脏进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: CD16 (2H7) Mouse mAb
使用 CD16 (2H7) Mouse mAb 对石蜡包埋的纯化 CD56+ 人外周血单核细胞沉淀物(左图,阳性)或 Raji 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
To Purchase # 88251S
目录# 规格 价格 库存
88251S
100 µl

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 小鼠 IgG2a

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
IHC Leica BOND 1:200 - 1:800
免疫组织化学(石蜡) 1:200 - 1:800

保存

以液体组织培养上清液形式保存,含有叠氮化钠作为防腐剂。保存在 4°C 时,可保持稳定 6 个月。切勿分装抗体。‭

实验步骤

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免疫组织化学法 (Leica®BOND™)

:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。

  步骤 试剂 时间/温度
1 脱蜡 BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution 预编程的 Leica® BOND™ 
2 抗原修复  BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 HIER 20 分钟
3 过氧化物封闭液 Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* 5 分钟
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 0:00 分钟
4 蛋白封闭液(可选) #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution   20 分钟 
5 一抗^ 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 30 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
6 Post Primary Mouse Linker Polymer Refine Detection Kit Post Primary*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
7 二次检测 Polymer Refine Detection Kit Polymer*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution/Deionized Water 定制(参见下文)
8a 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  0:00 分钟 
8b 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  10 分钟 
  洗涤 去离子水 3x 0:00 分钟
9 复染 Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin*  5 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  0:00 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
10 脱水(离线):    
  在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。  
  在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
  在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
11 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。  
       
  可选订制洗涤: BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 0:00
    去离子水 0:00

*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂

LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。

发布​时间 2018 年 8 月

修订时间 2018 年 9 月

实验步骤编号:1445

免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112)。
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Mouse #8125)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 让 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 按需在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926
兼容的
色原
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986  
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644  

注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​时间 2010 年 2 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:280

特异性/灵敏度

CD16 (2H7) Mouse mAb 可检测 CD16 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

使用与 CD16 蛋白外部结构域相对应的原核重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体,这对跨膜形式和 GPI 连接形式都是通用的。

背景

CD64 (FcgammaRI)、CD32 (FcgammaRII) 和 CD16 (FcgammaRIII) 是免疫球蛋白超家族的三大类。CD64 对含有三个 Ig 样结构域的 IgG 具有较高的亲和性,而 CD32 和 CD16 与具有两个 Ig 样结构域的 IgG 具有较低的亲和性。两种基因编码 CD16-A 和 CD16-B,导致它们仅在胞外域中存在 6 氨基酸差异。但 CD16-A 具有一个跨膜锚点,而 CD16-B 则具有一个糖基磷脂酰肌醇 (1)。CD64、CD32 和 CD16 是膜糖蛋白,在所有免疫活性细胞中表达,并且可引发不同的免疫功能(激活 B 细胞、吞噬作用、抗体依赖性细胞毒性、免疫复合体清除以及抗原呈递增强)(2)。CD16 交联会诱导 NK 细胞中 Lck 的酪氨酸磷酸化 (Tyr394) (3)。与 CD16 相对比的 CD32 在胞质域中具有酪氨酸激活基序,可结合加工这些基序的分子 (1)。

限制使用

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