反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 90 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:200 |
IHC-Leica® Bond™ | 1:100 - 1:400 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 - 1:800 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用蛋白 A 磁珠分离法对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
强烈建议进行细胞裂解物预清除步骤,以减少结合 Protein A Magnetic beads 的非特异性蛋白。为检测样品和同型对照预澄清足够裂解物。
重要提示:使用前,预先洗涤 #73778 磁珠:
一旦溶液变澄清,便小心清除缓冲液。添加 500 μl 1X 细胞裂解缓冲液到磁珠沉淀物中,稍微涡旋以洗涤珠子。将试管放回磁分离架。一旦溶液变澄清,便清除缓冲液。再次进行洗涤步骤。
重要提示:最佳裂解物浓度将取决于目的蛋白的表达水平。建议起始浓度为 250 μg/ml-1.0 mg/ml。
重要提示:强烈建议使用相应的同型对照,以便在你的一抗免疫沉淀中显示特异性结合。使用 Normal Rabbit IgG #2729、Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 和 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 分别进行兔多克隆一抗、兔单克隆一抗和小鼠单克隆一抗的对照检测。同型对照的浓度应匹配,并与一抗样品同时进行。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链 (~50 kDa) 产生的遮盖作用,我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb (#45262) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP 缀合物 #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:410
注:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。
步骤 | 试剂 | 时间/温度 | |
---|---|---|---|
1 | 脱蜡 | BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution | 预编程的 Leica® BOND™ |
2 | 抗原修复 | BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution | 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 20 分钟的热诱导表位修复 (HIER) |
3 | 过氧化物封闭液 | Refine Detection Kit Peroxide Block* | 5 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 0:00 分钟 | |
4 | 蛋白封闭液(可选) | #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution | 20 分钟 |
5 | 一抗^ | 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 | 30 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
不适用 | Post Primary Mouse Linker | Refine Detection Kit Post Primary* | 不适用 |
6 | 二次检测 | Refine Detection Kit Polymer* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution/Deionized Water | 定制(参见下文) | |
7a | 可视化 | Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 0:00 分钟 |
7b | 可视化 | Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 10 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 3x 0:00 分钟 | |
8 | 复染 | Refine Detection Kit Hematoxylin* | 5 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 0:00 分钟 | |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
9 | 脱水(离线): | ||
在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。 | |||
在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
10 | 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。 | ||
可选订制洗涤: | BOND™ Wash Solution | 2:00 | |
BOND™ Wash Solution | 分液器类型:开放式 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 2:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 分液器类型:开放式 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 0:00 | ||
去离子水 | 0:00 |
*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂
LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。
BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。
发布于 2018 年 8 月
修订于 2018 年 9 月
实验步骤编号:1444
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
---|---|---|
兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布于 2010 年 2 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
Thrombomodulin (E7Y9P) XP® 兔单克隆抗体可检测 CD141/Thrombomodulin 总蛋白的内源水平。
人
使用人 CD141/Thrombomodulin 重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
CD141/Thrombomodulin(TM、THBD、BDCA-3)是内皮细胞表面上表达的一种整合膜蛋白 (1)。作为凝血酶的辅因子,CD141/Thrombomodulin 激活并启动蛋白 C 抗凝血通路 (1-2)。CD141/Thrombomodulin 由一小部分人 CD11c+ 髓样树突细胞表达 (3-4). 这些 CD141+XCR1+ 树突状细胞交叉递呈抗原至初始 CD8+ T 细胞,引导它们成为激活细胞毒性 CD8+ T 细胞 (3-5)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。
专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专