反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 133 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
IHC Leica BOND | 1:200 - 1:800 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 - 1:800 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:200 - 1:800 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
注:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。
步骤 | 试剂 | 时间/温度 | |
---|---|---|---|
1 | 脱蜡 | BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution | 预编程的 Leica® BOND™ |
2 | 抗原修复 | BOND™ Epitope Retrieval ER1 Solution | 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER1 进行 20 分钟的 HIER |
3 | 过氧化物封闭液 | Refine Detection Kit Peroxide Block* | 5 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 0:00 分钟 | |
4 | 蛋白封闭液(可选) | #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution | 20 分钟 |
5 | 一抗^ | 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 | 15 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
不适用 | Post Primary Mouse Linker | Refine Detection Kit Post Primary* | 不适用 |
6 | 二次检测 | Refine Detection Kit Polymer* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution/Deionized Water | 定制(参见下文) | |
7a | 可视化 | Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 0:00 分钟 |
7b | 可视化 | Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 10 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 3x 0:00 分钟 | |
8 | 复染 | Refine Detection Kit Hematoxylin* | 5 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 0:00 分钟 | |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
9 | 脱水(离线): | ||
在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。 | |||
在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
10 | 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。 | ||
可选订制洗涤: | BOND™ Wash Solution | 2:00 | |
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 2:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 0:00 | ||
去离子水 | 0:00 |
*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂
LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。
BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。
发布时间 2018 年 8 月
修订时间 2018 年 9 月
实验步骤编号:1524
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
---|---|---|
兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2010 年 12 月
实验步骤编号:3
人
使用对人 CD133 蛋白的第 1 胞外环具有特异性的重组蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。该表位位于一个横跨氨基酸残基 303-312 的区域。
CD133(也称为 Prominin)首先被描述为在假定造血干细胞上经单克隆抗体 AC133 检测的一种细胞表面标志物 (1)。后续 cDNA 克隆表明,CD133 是一种五跨膜蛋白,分子量预测为 97 kDa。由于高度糖基化,经 SDS-PAGE 分析测定其表观分子量为 130 kDa (2)。除了造血干细胞,CD133 还在其他干细胞中表达,并且用于分离其他干细胞,包括癌症干细胞 (3-7)。CD133 的缺失突变会引发蛋白定位异常,进而导致人视网膜变性 (8)。
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