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60577
CD133 (A8N6N) Mouse mAb
一抗
单克隆抗体

CD133 (A8N6N) Mouse mAb #60577

引用 (3)
筛选器:
  1. F
Flow Cytometry Image 1: CD133 (A8N6N) Mouse mAb
使用 CD133 (A8N6N) Mouse mAb(实线)或浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415(虚线)对活性 293T 细胞(蓝色)和 Weri-Rb1 细胞(绿色)进行流式细胞分析。使用 Anti-mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。
To Purchase # 60577S
目录# 规格 价格 库存
60577S
100 µl

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 小鼠 IgG3

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术(活性) 1:50 - 1:200

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。-20℃ 保存。切勿分装抗体。

实验步骤

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针对非偶联小鼠抗体的活细胞实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):若要制备 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。
  3. 建议使用 Anti-Mouse 二抗
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8890
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4410
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (PE Conjugate) #59997

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

注意:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 100 µl 稀释的荧光物质偶联的二抗(按建议稀释度用抗体稀释缓冲液制备)中重悬细胞。
  7. 在冰上孵育 30 分钟。避光。
  8. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  9. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2011 年 2 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:58

特异性/灵敏度

CD133 (A8N6N) Mouse mAb 可识别 CD133 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

使用人 CD133 蛋白过表达的细胞,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

CD133(也称为 Prominin)首先被描述为在假定造血干细胞上经单克隆抗体 AC133 检测的一种细胞表面标志物 (1)。后续 cDNA 克隆表明,CD133 是一种五跨膜蛋白,分子量预测为 97 kDa。由于高度糖基化,经 SDS-PAGE 分析测定其表观分子量为 130 kDa (2)。除了造血干细胞,CD133 还在其他干细胞中表达,并且用于分离其他干细胞,包括癌症干细胞 (3-7)。CD133 的缺失突变会引发蛋白定位异常,进而导致人视网膜变性 (8)。

限制使用

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