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46512
CD11b/ITGAM (M1/70) Rat mAb
一抗
单克隆抗体

CD11b/ITGAM (M1/70) Rat mAb #46512

引用 (1)
筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: CD11b/ITGAM (M1/70) Rat mAb

使用 CD11B/ITGAM (M1/70) Rat Mab(绿色)对小鼠脑小胶质细胞(左图)或肝脏外周巨噬细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。切片用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封装。

Immunofluorescence Image 2: CD11b/ITGAM (M1/70) Rat mAb

使用 CD11b/ITGAM (M1/70) Rat mAb(绿色)和 β-Amyloid (D54D2) XP® 兔单抗 #8243(红色),对来自 5XFAD 阿尔茨海默病小鼠模型脑进行的共聚焦免疫荧光分析。切片用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封装。

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46512S
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支持数据

反应性 M
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 大鼠 IgG2b、kappa

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:50

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

实验步骤

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液:(1X PBS / 5% 常规血清/ 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清(例如 Normal Goat Serum (#5425) 添加至 9.5 ml 1X PBS)并充分混合。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. 建议的荧光染料标记抗大鼠二抗:

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后,室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2016 年 7 月

实验步骤编号:152

特异性/敏感性

CD11b/ITGAM (M1/70) 大鼠单克隆抗体可检测内源水平的 CD11b/ITGAM 总蛋白。该抗体可检测细胞外结构域中的表位。

物种反应性:

小鼠

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

来源/纯化

对组织培养上清液进行亲和层析纯化即可获得该单克隆抗体。

背景

分化抗原簇分子 11b (CD11b)/整合素 α m (ITGAM) 是一种跨膜蛋白,可形成由 α 和 β 亚基组成的异二聚体 (1)。CD11b 在骨髓系细胞中表达,通常用作骨髓系细胞的一个标记物,如中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和小胶质细胞 (2)。CD11b 在中性粒细胞中的 Ser1126 位点(细胞浆尾区)被磷酸化。研究表明,这种磷酸化活动对白细胞从血流传输到组织的过程中发挥作用 (3)。此外,全基因组关联研究表明,CD11b 与系统性红斑狼疮 (SLE) 等自身免疫病有关 (4)。

  1. Solovjov, D.A. et al. (2005) J Biol Chem 280, 1336-45.
  2. Murray, P.J. and Wynn, T.A. (2011) Nat Rev Immunol 11, 723-37.
  3. Fagerholm, S.C. et al. (2006) Blood 108, 3379-86.
  4. Rosetti, F. and Mayadas, T.N. (2016) Immunol Rev 269, 175-93.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

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