反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 48, 20 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:100 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
Caspase-1 (D7F10) Rabbit mAb 可检测全长人 Caspase-1 蛋白的内源水平。过表达即可检测激活的 p20 亚基。
人
猴
使用人类 caspase-1 的 p20 亚基中残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Caspase-1 或白介素-1ß 转化酶 (ICE/ICEα) 是一种 I 类半胱氨酸蛋白酶,还包括 caspase-4、-5、-11 和 -12。Caspase-1 能够将炎症细胞因子(如 pro-IL-1ß 和干扰素-γ 诱导因子 (IL-18))裂解成成熟蛋白 (1,2)。与其他半胱天冬酶一样,caspase-1 通过酶原蛋白水解被激活,产生一个由两个活性亚基 (p20 和 p10)组成的四聚体。Caspase-1 具有巨大的氨基末端前体域,此区域包含一个半胱天冬酶募集区域 (CARD)。Caspase-1 过表达会诱导细胞凋亡 (3)。Caspase-1 缺失小鼠在凋亡方面没有严重缺陷,但在 pro-IL-1β 蛋白的成熟过程中有缺陷,而且这类小鼠可抵抗内毒素休克 (4,5)。研究发现,caspase-1 至少有六种同工型,其中包括 caspase-1 α、β、γ、δ、ε 和 ζ (6)。多数 caspase-1 同工型(α、β、γ 和 δ)生成的产物在 30-48 kDa 之间,并通过过表达诱导细胞凋亡。Caspase-1 ε 通常只包含 p10 亚基,不会诱导细胞凋亡,可作为一种显性失活蛋白。Caspase-1 中广泛表达的 ζ 同工型会诱导细胞凋亡,并且与 α 同工型相比,缺乏 39 个氨基末端残基 (6)。caspase-1 通过一个称为“炎症小体”的寡聚化分子平台激活,此中包含 caspase-5、Pycard/Asc 和 NALP1 (7)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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