反应性 | H M R Mk |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 33, 40 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:100 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
BRCC36 (D5E5H) Rabbit mAb 可检测 BRCC36 总蛋白的内源水平。该抗体可检测 BRCC36 同工型 1 和 BRCC36 同工型 2。
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与人 BRCC36 同工型2 蛋白 His251 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
蛋白泛素化和去泛素化作用是由泛素酶和去泛素酶催化引起的可逆过程 (1,2)。去泛素酶 (DUB) 根据催化结构域的结构可分为 5 个亚家族:USP、OTU、MJD、UCH 和 JAMM/MPN。BRCC36 是一种锌依赖型 DUB,它属于 JAMM/MPN 亚家族,并且通过特异性地催化 K63 连接多聚泛素链的水解参与 DNA 损伤反应和干扰素信号转导 (3,4)。在细胞核内,BRCC36 是 BRCA1-A 复合物的一部分,该复合物包含 RAP80、BRCA1、ABRAXAS 和 MERIT40 (5,6)。该复合物在介导因电离辐射诱导的 DNA 双链断裂的细胞修复中发挥着重要作用 (7-10)。研究表明,BRCC36 在乳腺肿瘤中过度表达的比例很高,这可能促进乳腺癌细胞抵抗离子辐射诱导的凋亡 (4)。作为一种独特复合物的一部分,BRCC36 也可在细胞浆中发挥作用,并且该复合物被称为包含 BRCC36 的异肽复合物 (BRISC) (5,6)。事实上,研究表明 BRCC36 可通过去泛素和稳定 IFNAR1 来调节对干扰素的细胞应答 (3)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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