反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 380 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
人
使用与人 BRCA2 蛋白羟基末端特定的重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
乳腺癌易感蛋白 BRCA1 和 BRCA2 在遗传性乳腺癌和卵巢癌病人体内经常会发生突变,并且在与 DNA 损伤,修复,细胞周期进程,转录,泛素化和细胞凋亡等相关的多个过程中都能发挥作用 (1-4)。已经证明 BRCA2 为 Rad51 定位到 DNA 中双链断口 (DSB) 部位所必需,并且缺乏 BRCA1 和 BRCA2 的细胞不能通过 Rad51 依赖的同源重组过程 (HR) 修复 DSB (5)。据观察,已经在 BRCA1 蛋白上发现了多个 DNA 损伤诱导的磷酸化位点,其中包括 Ser988、1189、1387、1423、1457、1524和1542,并且依赖于细胞周期的方式激活的激酶,包括 Aurora A 和 CDK2,可分别磷酸化 BRCA1 的 308 和 1497 位丝氨酸 (6-10)。已经提出 CDKs 所致的BRCA2 在 Ser3291 处细胞周期依赖性磷酸化作为随细胞越过 S 期推进,通过封闭羧基末端 Rad51 结合位点关闭 HR 的机制 (11)。
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