反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 220 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:50 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
BRCA1 (A8X9F) Rabbit mAb 可检测 BRCA1 总蛋白的内源水平 。
人
使用与人 BRCA1 蛋白氨基末端特定的重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
乳腺癌易感蛋白 BRCA1 和 BRCA2 在遗传性乳腺癌和卵巢癌病人体内经常会发生突变,并且在与 DNA 损伤,修复,细胞周期进程,转录,泛素化和细胞凋亡等相关的多个过程中都能发挥作用 (1-4)。据悉, 在 Rad51 定位到双链损伤 (DSB) 区域时 BRCA2 必不可少,并且细胞缺乏 BRCA1 和 BRCA2 就不能通过 Rad51 依赖的同源重组过程 (HR) 修复 DSB (5)。据观察,已经在 BRCA1 蛋白上发现了多个 DNA 损伤诱导的磷酸化位点,其中包括 Ser988、1189、1387、1423、1457、1524和1542,并且依赖于细胞周期的方式激活的激酶,包括 Aurora A 和 CDK2,可分别磷酸化 BRCA1 的 308 和 1497 位丝氨酸 (6-10)。由 CDKs 催化的细胞周期依赖的 BRCA2 3291 位丝氨酸的磷酸化被认为是 BRCA2 阻止 HR 的机制,因为细胞在前进至 S 期时羧基末端的 Rad51 结合区域被屏蔽 (11)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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