反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 210 |
来源/同种型 | 小鼠 IgG2a |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:19
人
使用与人 Bcr-Abl 的 b2a2 连接位点序列相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Bcr 基因最初是通过其在嵌合 Bcr-Abl 癌基因中的存在而鉴定出来的 (1)。Bcr 氨基末端区域含有一个寡聚化结构域、一个丝氨酸/苏氨酸激酶结构域和一个与 SH2 结构域结合的区域。蛋白质的中间有一个 PH 结构域和一个序列类似于 GTP 结合蛋白 Rho 家族鸟嘌呤核苷酸交换因子的区域。羧基末端区域可能涉及小 GTP 结合蛋白 Rac 的 GTP 酶激活功能 (2,3)。细胞中野生型 Bcr 的功能尚不清楚。PDGF 受体可能使用 Bcr 作为下游信号转导的调解器 (4)。研究显示,Bcr-Abl 融合导致组成性激活的酪氨酸激酶产生,从而导致慢性粒细胞性白血病 (CML)(5)。Bcr 的 Tyr177 位点在 Bcr-Abl 融合蛋白中被磷酸化,这在转变 Bcr-Abl 活性中发挥了重要作用 (6)。磷酸化的 Tyr177 位点为 Gab2 和 GRB2 提供了锚定位点 (7,8)。
由 Bcr-Abl 编码的融合蛋白在大小上根据 BCR 基因中的裂点而有所差异。至今,已有三个特征明确的裂点簇区:主要裂点簇区 (M-bcr)、次要裂点簇区 (m-bcr) 和微小裂点簇区 (mu-bcr)。绝大多数的 CML 患者携带 p210 Bcr-Abl 基因 (M-bcr),患者的 mRNA 转录子有一个 b3a2 和/或一个 b2a2 接头。最小的融合蛋白 p190 Bcr-Abl (m-bcr 裂点)主要与 Ph-阳性 ALL 关联。CML 的罕见病例是 Bcr-Abl 基因的 p190 型所致,在这些病例中,有一个颇似 CMML 的显著单核细胞组分。因 p230 Bcr-Abl 基因(mu-bcr 裂点)而导致的 CML 也很罕见,已显示出与 CNL 变体和/或带有显著的血小板增多相关。 异常的 CML 病例已发现 Bcr 裂点存在于三个明确簇区之外或带有 Abl 中的不寻常裂点 (9)。
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