产品货号 | 规格 | 价格 | 库存 |
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3920S | 100 µl |
为庆祝中国农历新年,我们的中国办事处关闭。我们将于星期四(2 月 18 日 )开放。
感谢您的耐心等待。
反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 52,46,33 |
来源/亚型 | 小鼠 IgG1 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:100 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:262
本实验步骤适用于使用蛋白 G 磁性分离法对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
强烈建议进行细胞裂解物预清除步骤,以减少结合 Protein G Magnetic beads 的非特异性蛋白。为检测样品和同型对照预澄清足够裂解物。
重要提示:使用前,预先洗涤 #70024 磁珠:
转移 20 μl 珠浆到一根干净的试管中。将试管放在磁分离架上 10-15 秒钟。
一旦溶液变澄清,便小心清除缓冲液。添加 500 μl 1X 细胞裂解缓冲液到磁珠沉淀物中,稍微涡旋以洗涤珠子。将试管放回磁分离架。一旦溶液变澄清,便清除缓冲液。再次进行洗涤步骤。
重要提示:最佳裂解物浓度将取决于目的蛋白的表达水平。建议起始浓度为 250 μg/ml-1.0 mg/ml。
重要提示:强烈建议使用相应的同型对照,以便在你的一抗免疫沉淀中显示特异性结合。使用 Normal Rabbit IgG #2729、Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 和 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 分别进行兔多克隆一抗、兔单克隆一抗和小鼠单克隆一抗的对照检测。同型对照的浓度应匹配,并与一抗样品同时进行。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:对于分子量大约为 50 kDa 的蛋白,我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb (#45262) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP 缀合物 #5127)作为二抗,以尽量减少变性重链产生的干扰。对于分子量大约为 25 kDa 的蛋白,建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP 缀合物 #5127),以尽量减少变性轻链产生的干扰。
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:121
Bag1 (3.10G3E2) Mouse mAb 可检测 Bag1 总蛋白的内源水平,如长、中、短同工型。
人
使用人重组全长 Bag1 对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Bag1 属于 Bcl-2 相关永生基因 (BAG) 多功能蛋白家族,它是从人体分离的六个相关蛋白中的第一个蛋白 (1,2)。这个广泛表达的蛋白与很多信号转导分子(包括 Bcl2、HGF 受体和 Raf1)相互作用,并在涉及细胞存活、生长和分化的通路中调节信号转导分子。Bag1 蛋白最常见的功能是促凋亡蛋白的抑制剂 (2-4)。Bag1 还在 Raf1 信号转导中发挥作用,可以作为转录激活剂结合 DNA (4)。Bag1 蛋白是其结合伴侣 HSP70 的特征明显的抑制剂 (5)。Bag1 的保守羧基末端 BAG 结构域与 HSP70 的 ATP 酶结构域相互作用,以负调控热休克蛋白分子伴侣的活性 (6,7)。Bag1 蛋白的多个同工型从一个转录过程中生成,共享一个常见的泛素同源性结构域和一个羧基末端 Hsp70 结合域,但在长度和细胞定位上有区别。50 kDa 的长同工型 (Bag1-L) 还包含一个核定位信号,通常见于细胞核,并在细胞核中激活转录。46 kDa 的中等同工型 (Bag1-M) 主要见于细胞浆,但也可以在与其它蛋白质结合后转位到细胞核。29-33 kDa 的短同工型 (Bag1-S, Bag-1) 主要发现于细胞浆 (8)。抗凋亡 Bag1 蛋白的高表达与某些癌症患者的存活率升高相关,这引起研究人员对 Bag1 蛋白的潜在治疗作用进行了研究 (9)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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