反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 95, 98 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:50 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
Axin2 (76G6) Rabbit mAb 可检测 Axin2 总蛋白的内源水平。它不会与 Axin1 发生交叉反应。
人
使用与人 Axin2 的 Pro566 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Axin1(轴抑制蛋白1)和 Axin2 为多结构域支架蛋白,可负调控 Wnt 信号转导。Axin1 与 APC、GSK-3β、Dvl 和 β-catenin 相互作用并促进 由 GSK-3β 介导的磷酸化和随后的 β-catenin 降解 (1,2)。在 Wnt 刺激细胞时,Axin1 被磷酸化的 LRP5/6 募集至细胞膜,该过程被认定为对 Wnt 信号转导的激活非常重要 (3,4)。除了在 Wnt信号转导通路中起作用外,Axin1 还与 MEKK1 形成复合体,并激活 c-Jun 氨基末端激酶 (JNK/SAPK) (5)。Axin2(也称为 Conductin 或 Axil)可从功能上替代小鼠体内的 Axin1 (6)。Axin2 自身是 Wnt 信号转导通路的直接靶标,因此可通过负反馈环 (7-9) 参与控制 Wnt 信号转导的持续时间和强度。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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