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46486
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit
一抗
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Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit #46486

引用 (1)
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 FIP200 (D10D11) Rabbit mAb，对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb 对 RD、PANC-1 和 A20 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Atg101 (E1Z4W) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb（上图）或 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb #8054（下图）对未处理的 (-) 或经 mTOR 抑制剂（ Torin-1（250 nM，持续5 小时），Torin-2（250 nM，持续5 小时），或 INK128（250 nM，持续5 小时））处理的 A172 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 对未处理的或经 oligomycin #9996（0.5 μM，持续30 分钟）处理的 MCF7 细胞提取物，以及未处理的或经过氧化氢（10 mM，持续5分钟）处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 6
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 8
使用 FIP200 (D10D11) Rabbit mAb（上）或 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下），对未处理 (-) 或经氯喹处理（50 μM，过夜；+）的 A172 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb（上）或 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278（下）对转染空载 (-) 或转染 Myc/DDK 标记人全长 Atg13 表达载体 (hAtg13-Myc/DDK; +) 的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 Atg101 (E1Z4W) Rabbit mAb（上）和 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278（下）对转染空载 (-) 或经构建表达 Myc/DDK 标记人全长 Atg101 蛋白的转染 (hAtg101-Myc/DDK; +) 的 293 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 12
使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb（左图）对未处理的或经 oligomycin #9996（0.5 µM，持续30 分钟）处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。使用磷酸化（中间图）或在 ULK1 的 Ser555 周围区域的非磷酸化肽（右图）来预孵育抗体，从而证实磷酸化的特异性。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对野生型 MEF 和 ULK1 (-/-) MEF 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。MEF 细胞由 Reuben Shaw 博士 (Salk Institute, La Jolla, CA) 惠赠。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 14
使用 FIP200 (D10D11) Rabbit mAb，对转染空载 (-) 或转染表达人全长 FIP200 (hFIP200；+) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb（上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-) 或 SignalSilence® Atg13 siRNA I #12043 (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb 可确认 Atg13 的表达沉默，而 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 则用作上样对照。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) 兔单克隆抗体对未经处理（左图）、未经处理后再经 λ-磷酸酶处理（中图）或经 Torin 1 #14379（250 nM，5 小时；右图）处理的 MCF7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色 = Hoechst 33342 #4082（DNA 荧光染料）。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb（上图）或 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb #8054（下图）对未处理的 (-) 或经羰基氰化物3-氯苯腙(CCCP)（100 μM，持续2 小时； +）处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 18
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 FIP200 (D10D11) Rabbit mAb （泳道 3），对来自 JJN-3 细胞提取物的 FIP200 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 FIP200 (D10D11) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype control #3900（泳道 2）或 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb（泳道 3）对 RD 细胞提取物 Atg13 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit: Image 20
使用 Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（绿色）或已经过 Torin 1 #14379（250 nM，2 小时；蓝色）处理的 SCLC-21H 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
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46486T		 1 个试剂盒（6 x 20 微升）

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产品说明

Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit 提供一种经济有效的方法来检测 ULK1 复合体中的靶标蛋白。该试剂盒含有足量的抗体，每种一抗至少可进行两次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

ULK1 (D8H5) Rabbit mAb、Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb、FIP200 (D10D11) Rabbit mAb 和 Atg101 (E1Z4W) Rabbit mAb 可检测相应靶标蛋白的总内源水平（不受磷酸化状态影响）。仅当小鼠 ULK1 的 Ser555（相当于人 ULK1 的 Ser556 ）发生磷酸化时，Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 才能检测 ULK1 的内源水平。在 90 和 100 kDa 之间检测到未知来源的条带。仅当小鼠 ULK1 的 Ser757（相当于人 ULK1 的 Ser758 ）发生磷酸化时，Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb 才能检测 ULK1 蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用与人 ULK1 蛋白 Arg600 周围残基、人 Atg13 蛋白 Asp462 周围残基、人 Atg101 蛋白 Val177 周围残基或人 FIP200 蛋白羧基末端附近的残基相应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与小鼠 ULK1 蛋白 Ser555（相当于人 ULK1 的 Ser556）周围残基，或小鼠 ULK1 蛋白 Ser757（相当于人 ULK1 的 Ser758）周围残基相应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生磷酸特异性单克隆抗体。

背景

自噬是自噬溶酶体降解大部分细胞浆内容物的一种分解代谢过程 (1,2)。通常在营养剥夺条件下激活自噬，但自噬也与一些生理过程有关，如发育、分化、神经变性、感染和癌症 (3)。已在酵母中大量发现自噬的分子机制，被称为‭自‭噬‭基‭‬因‭ (Atg)。ULK1、Atg13 和 FIP200 形成的复合体可以定位自噬的隔离膜并调节自噬体生物合成 (4-6)。mTOR 可磷酸化 Atg13 和 ULK1，抑制 ULK1 的激酶活动和自噬 (5-7)。Atg101 和 Atg13 之间的相互作用对 Atg13 和 ULK1 的稳定性和基础磷酸化非常重要 (8,9)。在营养不足情况下被激活的 AMPK 可直接磷酸化多个位点的 ULK1，包括 Ser317、Ser555 和 Ser777 (7,10)。相反，作为细胞生长调节分子和自噬抑制剂的 mTOR 可以磷酸化 Ser757 位点上的 ULK1 ，并破坏 ULK1 和 AMPK 之间的相互作用 (7)。
  1. Reggiori, F. and Klionsky, D.J. (2002) Eukaryot Cell 1, 11-21.
  2. Codogno, P. and Meijer, A.J. (2005) Cell Death Differ 12 Suppl 2, 1509-18.
  3. Levine, B. and Yuan, J. (2005) J Clin Invest 115, 2679-88.
  4. Ganley, I.G. et al. (2009) J Biol Chem 284, 12297-305.
  5. Hosokawa, N. et al. (2009) Mol Biol Cell 20, 1981-91.
  6. Jung, C.H. et al. (2009) Mol Biol Cell 20, 1992-2003.
  7. Kim, J. et al. (2011) Nat Cell Biol 13, 132-41.
  8. Mercer, C.A. et al. (2009) Autophagy 5, 649-62.
  9. Hosokawa, N. et al. (2009) Autophagy 5, 973-9.
  10. Egan, D.F. et al. (2011) Science 331, 456-61.

通路和蛋白

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