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95830
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合
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ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit #95830

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使用 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 ATRX (D1N2E) Rabbit mAb（上）和 Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb #14574 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。正如预期，在阴性细胞系 U2OS 中未出现 ATRX 信号。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 Daxx (25C12) Rabbit mAb，对 K562（人）细胞系、A20（小鼠）细胞系和 PC12（大鼠）细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
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一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 6
抗体特异性通过蛋白质印迹法确定。对 HeLa 与 NIH/3T3 细胞裂解物使用 Tri-Methyl Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb (小图 A) 或 Tri-Methyl Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb 进行检测，后者使用 1.5 μM 不同竞争肽 (小图 B-M) 作预吸附处理。如图所示，只有三甲基组蛋白 H3 (Lys9) 肽 (小图 E) 与抗体的结合具有优势。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道 2 ) 或 ATRX (D1N2E) Rabbit mAb (泳道 3 ) 对 293T 细胞提取物中的 ATRX 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 ATRX (D1N2E) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 8
使用 Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 Daxx (25C12) Rabbit mAb（绿色），对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb (绿色) 和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700 (红色)，对未经处理（上图）或经 λ 磷酸酶处理的（下图）间期（左图）或有丝分裂期（右图）HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。如上所示，当邻近的 Ser10 残基被磷酸化之后，该抗体无法检测有丝分裂细胞中的三甲基组蛋白 H3 Lys9。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对 HeLa 细胞的交联染色质和 ATRX (D1N2E) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 human 18s rDNA repeat primers、SimpleChIP® Human 28s rDNA Repeat Primers #14901 和 SimpleChIP® Human GAPDH Exon 1 Primers #5516，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量，用染色质投入总量（相当于 1）相对应的信号进行表示。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 12
使用 Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb（绿色）和 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #2116（红色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 13
使用以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作对照的 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb（实线），对 HeLa 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 14
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb（实线）对 Hela 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
ATRX/Daxx Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对 HeLa 细胞中提取的交联染色质，在加入 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human GAPDH Exon 1 Primers #5516、SimpleChIP® Human AFM Intron 1 Primers #5098、SimpleChIP® Human MYT-1 Exon 1 Primers #4493 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量，用染色质投入总量（相当于 1）相对应的信号进行表示。
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95830T		 1 个试剂盒（4 x 20 微升）

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产品说明

ATRX/Daxx 抗体小包装组合提供了一种使用抗体检测 ATRX 和 Daxx 以及相关组蛋白标志物的经济方法。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/敏感性

ATRX (D1N2E) Rabbit mAb 可识别 ATRX 总蛋白的内源水平。Daxx (25C12) Rabbit mAb 可检测 Daxx 总蛋白的内源水平。尽管 Daxx 具有 81 kDa 的计算 MW，已经证实它以 110 kDa 的表观 MW 运行，这至少部分地归因于翻译后过度磷酸化 (5)。 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb 在 Lys9 位点三甲基化时可检测组蛋白 H3 的内源水平。已显示该抗体与 Lys9 位点二甲基化的组蛋白 H3 具有一定的交叉反应性，但是不会与非甲基化或单甲基化的组蛋白 H3 Lys9 发生交叉反应。当有丝分裂过程中邻近的 Ser10 残基被磷酸化时，该抗体无法检测三甲基化组蛋白 H3 Lys9。另外，该抗体也不与单甲基化的组蛋白 H3 Lys4、Lys27、Lys36 或 Lys79 发生交叉反应。Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb 可检测 H3 总组蛋白（包括同工型 H3.1、H3.2 和 H3.3）的内源水平。 该抗体还可以检测组蛋白 H3 变异体 CENP-A。该抗体不会与其他核心组蛋白发生交叉反应。

来源/纯化

使用与人 ATRX 蛋白中 Leu1189 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 ATRX (D1N2E) Rabbit mAb。使用与 Daxx 的 Gln255 周围的区域相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 Daxx (25C12) Rabbit mAb。使用与 Lys9 三甲基化组蛋白 H3 氨基末端附近的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb。通过采用与人源 H3 组蛋白的羧基末端相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生 Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb。

背景

α-地中海贫血/智力缺陷综合征 X 染色体连锁物 (ATRX) 是一种转录调节分子和螺旋酶，属于染色质重组蛋白的 SNF2 家族 (1,2)。ATRX 与其结合伴侣死亡相关蛋白 6 (Daxx) 一起，充当组蛋白分子伴侣，使组蛋白变异体 H3.3 在某些重复 DNA 序列（如端粒、着丝点周围以及核糖体基因重复序列）处发生沉淀 (3-6)。ATRX 可涉及多种胞核功能，以确保有丝分裂过程中有适当的姐妹染色单体凝聚和减数分裂过程中的染色质排列 (7,8)。ATRX 转录调节分子可以影响高度 DNA 重复序列处 DNA 的甲基化模式，从而在哺乳动物发育过程中起到维持端粒完整性和调节基因表达的作用 (9,10)。ATRX 相应基因突变可导致 ATR-X 综合征，这是一种 X 染色体功能障碍，特征是智力低下、颅脑畸形以及慢性 α-地中海贫血 (11,12)。研究表明在多种癌症中均发现 ATRX 蛋白缺失，包括胰腺神经内分泌瘤 (PanNETs) 和儿童胶质母细胞瘤，在这些肿瘤中端粒的维持不依赖于端粒酶 (13-16)。
Daxx 是普遍表达的蛋白质，其最初通过酵母双杂交筛选鉴定为与 Fas 胞质结构域的相互作用物。发现它增强 Fas 介导的凋亡并激活 JNK 通路 (17)。但是，附加研究已经揭示，Daxx 实际上是定位至早幼粒细胞白血病致瘤结构域 (PODs) 上的核蛋白 (18,19)。已经随 CENP-C (20)、Pax3(22)、DNA 甲基转移酶 I (21) 和染色质相关蛋白（包括组蛋白脱乙酰酶 II、H2A、H2B、H3、H4 和 Dek）观察到胞核相互作用。已经提出 Daxx 在转录抑制和细胞周期控制中发挥作用。小鼠中 Daxx 丢失导致胚胎死亡伴随广泛的发育性凋亡，提示 Daxx 直接或间接在抑制细胞死亡中发挥作用 (22)。另外，使用 RNAi 抑制 Daxx 表达已经证实 Daxx 具有抗凋亡性并阻抑靶标（包括 NF-κB 和 E2F-1）的转录活性 (23)。
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通路和蛋白

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