反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 350 |
来源/同种型 | 小鼠 IgG1 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:19
人
通过采用与人 ATM 蛋白的氨基酸 992-1144 相对应的重组蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
ATM(共济失调毛细血管扩张突变激酶)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,因其在响应 DNA 双链断口 (DSB) 的 DNA 修复信号转导中的作用而闻名。当 DSB 出现时,MRE11:RAD50:NBS1 (MRN) 传感器复合体将 ATM 招募到 DNA 损伤部位。然后 ATM 向众多效应蛋白发出信号,从而导致细胞反应,包括 DNA 修复的调节、细胞周期进程、细胞凋亡、衰老、基因转录。与 ATR、DNA-PKcs、SMG1 和 mTOR 一起,ATM 是 PI3K 样蛋白激酶 (PIKK) 家族的成员。PIKK 家族成员通常响应于各种类型的细胞应激发挥作用。ATM 的底物很多,包括 CHK2、AKT、p53、BRCA1 和 DNA-PK(在 1,3 中回顾)。非活性 ATM 以同二聚体形式存在。响应于 DSB 时,ATM 在 Ser1981 反式发生自磷酸化,从而导致复合物解离成为活性单体 (2)。功能性 DNA 修复通路在细胞稳态中很重要,这些通路中的缺陷会导致基因组不稳定,从而导致肿瘤发生 (3)。ATM 的失活导致共济失调性毛细血管扩张症 (AT),这是一种以易患癌症为特征的神经退行性疾病 (4)
探索与本品相关的通路。
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