反应性 | H M R |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 39 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
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蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 ARH3 蛋白的 Pro241 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
ADP-核糖基化是一种可逆翻译后修饰 (PTM),其中来自 β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD+) 的 ADP-核糖 (ADPr) 基团的单个单元或聚合物转移到靶标蛋白的特定残基上 (1)。除蛋白质外,也确定 DNA 分子和 RNA 分子为 ADP-核糖基化的靶标 (2,3)。这种修饰受一组不同的 ADP-核糖基转移酶 (ART) 催化,这些酶大多数作用在于添加单个 ADPr 单元 (MAR 化) ,而聚(ADP-核糖)聚合酶 (PARP) 完成多重 ADPr 的沉积。ADP-核糖基化的逆转由进化上不同的宏结构域和 ADP-核糖基水解酶 (ARH) 蛋白家族实现 (4)。具体而言,聚(ADP-核糖)糖水解酶 (PARG) 或 ADP-核糖基水解酶 3 (ARH3) 将 PAR 化物降解至单个 ADPr 单元,而 MacroD1、MacroD2、TARG1 或 ARH1 将它们从靶标残余物完全移除 (5)。ADP-核糖基化及其调节酶参与广泛的细胞过程,例如 DNA 修复、染色质调节、转录和细胞应激反应 (1,4)。此外,已证明 ADP-核糖基化在各种癌症、神经退行性疾病和炎症中是治疗关键性 PTM (6)。
ADP-核糖水解酶的 ARH 家族包含氨基酸序列相似但酶活性不同的三种蛋白质。ARH3,亦称 ADPRHL2,是一种以细胞类型特异性方式定位于胞核、胞质和线粒体的遍在性蛋白质 (7-9)。ARH3 在其偏好水解 DNA 损伤所诱导丝氨酸 ADP-核糖基化方面表现出与 PARG 存在部分冗余,这奠定这些酶在维持基因组稳定性中的关键作用。已证明 Arh3-KO 小鼠响应于缺血再灌注损伤出现脑梗死增加 (10),而人类 ARH3 缺陷是一种征在于神经退行性病变和早期死亡的隐性常染色体罕见疾病 (11,12)。
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