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92570
Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit #92570

引用 (1)
Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 1

对未经处理 (-) 或已经以下联合处理方法处理(如图)的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 TNF-α(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,7 小时;+),使用 Phospho-RIP (Ser166) (D1L3S) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb(蓝色)对照 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(红色)对 MCF7 细胞进行流式细胞术分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 3

对未经处理 (-) 或已经以下联合处理方法处理(如图)的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 TNF-α(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,7 小时;+),使用 Phospho-MLKL (Ser358) (D6H3V) Rabbit mAb(上图)或 MLKL (D2I6N) Rabbit mAb #14993(下图)。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 MLKL (D2I6N) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。KARPAS 细胞系来源:剑桥大学 Abraham Karpas 博士。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用与非特异性的阴性对照抗体(红色)作为 Caspase-3(Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 的对照,对未经(蓝色)或已经(绿色)etoposide #2200 处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb (上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下)对未处理 (-) 或经 Staurosporine #9953 (1 μM;3小时) 或 Etoposide #2200 (25 μM,过夜) 处理的不同细胞系进行蛋白质印迹分析。MCF7 细胞对 caspase-3 表达呈阴性。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 Cleaved Caspase-8 (Asp384) (11G10) Mouse mAb(左)或 Caspase-8 (1C12) Mouse mAb #9746(右),对未经或经抗 Fas 处理 (1 µg/ml) 的 SKW6.4 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 Caspase-8 (D35G2) Rabbit mAb,对 HeLa、THP-1 和 YB2/0 细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 Caspase-8 (D35G2) Rabbit mAb #4790(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照型 HeLa 细胞 (lane 1) 或 Caspase-8 敲除型 HeLa 细胞 (lane 2) 的提取物进行蛋白印迹分析。Caspase-8 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 Caspase-8 的特异性。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 10

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb(绿色)对 OVCAR8 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 MLKL (D2I6N) Rabbit mAb (上)或 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(下),对转染空载 (-) 转染 Myc/DDK 标签的全长人 MLKL 蛋白表达载体 (hMLKL-Myc/DDK;+) 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb(绿色)标记的且未经(左)或经(右)Staurosporine #9953 处理的 HT-29 细胞的共聚焦免疫荧光图像。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb #14220(上图)和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对 HCT116 细胞(泳道 1)或 CASP3 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。CASP3 敲除型 HCT116 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 CASP3 的特异性。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Caspase-8 (D35G2) Rabbit mAb,对 CTLL-2 细胞提取物进行蛋白质印迹分析,CTLL-2 细胞为未经处理 (-), 或使用 Cycloheximide #2112(CHX,10 μg/ml,过夜后) 再经Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902(20 ng/ml,4小时;+的处理 。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 17

在对照肽(左)或 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Blocking Peptide (#1050)(右)存在的情况下,使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 Caspase-8 (D35G2) Rabbit mAb,对 293T 细胞进行蛋白质印迹分析,293T 细胞经或转染空载 (-) 或构建DNA表达Myc/DDK 标记的全长人类 Caspase-8 蛋白 (hCasp8-Myc/DDK;+)、或全长小鼠 Caspase-8(mCasp8;+)或全长人类 Caspase-10 蛋白(hCasp10;+)。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb 对未转染或转染人 RIP 表达载体的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对 SignalSlide® Cleaved Caspase-3 IHC Controls #8104(石蜡包埋的 Jurkat 细胞,未经(左)或经(右)etoposide 处理进行免疫组织化学分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学染色,以显示凋亡细胞细胞浆定位。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 etoposide(25uM, 5 小时)处理的 Jurkat 细胞的提取物进行免疫沉淀法。使用同一抗体进行蛋白质进行印迹分析。

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 staurosporine #9953(1uM,3 小时)或 etoposide #2200(25uM,5 小时)处理的 C6(大鼠)、NIH/3T3(小鼠)和 Jurkat(人源)提取物进行蛋白质印迹分析。

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92570T
1 个试剂盒(8 x 20 µl)

产品说明

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit 是一种高性价比的方式,可用于检测细胞凋亡和坏死性凋亡的标记物。该试剂盒包含的一抗足以进行至少 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其内源水平的靶标蛋白。MLKL (D2I6N) Rabbit mAb 会与某些细胞系中的 130 kDa 条带发生交叉反应。Phospho-MLKL (Ser358) (D6H3V) Rabbit mAb 还会与在 Thr357 和 Ser358 位点被双重磷酸化的 MLKL 发生反应。Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 可检测全长 caspase-3 以及在细胞凋亡过程中剪切产生的 caspase-3 的大亚基 (p20)。Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1) Rabbit mAb 可检测内源水平的 caspase-3 大亚基,但无法检测全长 caspase-3 或其他裂解 caspase。Cleaved Caspase-8 (Asp384) (11G10) Mouse mAb 可检测天门冬氨酸 384 裂解产生的 caspase-8 小片段的内源水平。抗体不与全长 caspase-8 发生交叉反应。Caspase-8 (D35G2) Rabbit mAb 可检测 caspase-8 总蛋白,包括已激活蛋白的 p10 亚基的内源水平。它还会与过表达的 caspase-10 发生交叉反应。

来源/纯化

使用人 RIP1 的 Leu190、人 MLKL 和人 caspase-8 的羧基末端、人 caspase-8 的 p10 的氨基末端序列、人 caspase-3 的 Asp175 周围的氨基末端残基周围的合成肽、与 caspase-3 的 p20 亚基相对应的重组蛋白和人 RIP 的 Ser166 和人 MLKL 的 Ser358 周围的磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

细胞凋亡是一种会导致细胞死亡的受调控生理过程 (1,2)。作为半胱氨酸蛋白酶的一族,半胱天冬酶是细胞凋亡的中心调节分子。 caspase 被合成为失活酶原,酶原包括前肽结构域和经 caspase 活性级联蛋白水解加工的大亚基 (p20) 和小亚基 (p10)。起始半胱天冬酶(包括8、9、10 和 12)可与促凋亡信号紧密耦合。一旦被激活,这些 caspase 就裂解并激活下游效应子 caspase (包括 3、6 和 7),这些下游效应子 caspase 反过来裂解细胞骨架和胞核蛋白(如 PARP、α-fodrin、DFF 和 lamin A)并诱导细胞凋亡。线粒体释放的细胞色素 c 偶联激活的 caspase-9,caspase-9 是一种关键起始因子 caspase。通过涉及肿瘤坏死因子受体超家族死亡受体的外源性机制所诱导的细胞凋亡会激活 caspase-8。激活的 caspase-8 会裂解并激活下游效应子 caspase ,如 caspase-1、-3、-6 和 -7。Caspase-3 是细胞凋亡的一个关键执行者,因为它部分负责或完全负责许多关键蛋白的溶蛋白性裂解,如核酶多(ADP-核糖)聚合酶 (PARP)。

坏死性凋亡是一个坏死性细胞死亡的调控通路,肿瘤坏死因子 (TNF) 家族的细胞因子、病原体感应蛋白(如 toll 样受体 (TLR))和缺血性损伤等许多炎症信号都会诱发坏死性凋亡 (3,4)。caspase-8 介导的细胞凋亡会负向调节坏死性凋亡,在这种情况下,激酶 RIP/RIPK1 被裂解 (5)。此外,RIP 的小分子抑制剂 necrostatin-1 (Nec-1) 也会抑制坏死性凋亡 (6)。研究表明,坏死性凋亡会导致许多病理情况,并且 Nec-1 经证明可在缺血性脑损伤等模型中提供神经保护 (7)。RIP 在激酶结构域中对 Nec-1 敏感的多个位点被磷酸化,这些位点包括 Ser14、Ser15、Ser161 和 Ser166 (8)。磷酸化可促进与 RIP3 的结合,这是坏死性凋亡所必需的 (9-11)。混合谱系激酶结构域样蛋白 (MLKL) 是一个在坏死性凋亡通路中被认定为 RIP3 的下游靶标的假激酶 (12)。在坏死性凋亡中,RIP3 在 Ser227 位点被磷酸化,这会募集 MLKL 并导致其在 Thr357 和 Ser358 位点的磷酸化 (12)。通过多种机制敲除 MLKL 可抑制坏死性凋亡 (13)。尽管 MLKL 诱发坏死性凋亡的精确机制尚不明确,但是部分研究已显示坏死性凋亡会诱发 MLKL 的寡聚化并使其易位至质膜,进而影响膜的完整性 (14-17)。

  1. Degterev, A. et al. (2003) Oncogene 22, 8543-67.
  2. Green, D.R. (1998) Cell 94, 695-8.
  3. Christofferson, D.E. and Yuan, J. (2010) Curr Opin Cell Biol 22, 263-8.
  4. Kaczmarek, A. et al. (2013) Immunity 38, 209-23.
  5. Lin, Y. et al. (1999) Genes Dev 13, 2514-26.
  6. Degterev, A. et al. (2008) Nat Chem Biol 4, 313-21.
  7. Degterev, A. et al. (2005) Nat Chem Biol 1, 112-9.
  8. Ofengeim, D. and Yuan, J. (2013) Nat Rev Mol Cell Biol 14, 727-36.
  9. Cho, Y.S. et al. (2009) Cell 137, 1112-23.
  10. He, S. et al. (2009) Cell 137, 1100-11.
  11. Zhang, D.W. et al. (2009) Science 325, 332-6.
  12. Sun, L. et al. (2012) Cell 148, 213-27.
  13. Wu, J. et al. (2013) Cell Res 23, 994-1006.
  14. Cai, Z. et al. (2014) Nat Cell Biol 16, 55-65.
  15. Chen, X. et al. (2014) Cell Res 24, 105-21.
  16. Wang, H. et al. (2014) Mol Cell 54, 133-46.
  17. Dondelinger, Y. et al. (2014) Cell Rep 7, 971-81.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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