反应性 | H M R Mk B Pg |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 38 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 - 1:800 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:100 - 1:200 |
流式细胞术(固定/通透) | 1:50 - 1:200 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
若想获得高质量的免疫荧光图片,请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。
注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2013 年 11 月
实验步骤编号:24
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:404
人, 小鼠, 大鼠, 猴, 牛 , 猪
犬 , 马
使用与人膜联蛋白 A2 的 Phe307 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
膜连蛋白 A2 (ANXA2)(也称脂皮素 II 或依钙蛋白-1 重链)是 36 kDa 的膜联蛋白超家族成员,通过膜联蛋白重复序列以钙依赖的方式结合磷脂和其他蛋白质 (1)。膜联蛋白 A2 包含四个重复序列,并通过四个重复序列介导蛋白与蛋白、蛋白与脂质之间的相互作用 (1-4)。它与 S100A10 形成一种结构性异源四聚体,可作为肌动蛋白细胞骨架、质膜和内吞囊泡结构之间的桥梁 (5-7)。膜连蛋白 A2 最初被认定为磷脂酶 A2 的蛋白抑制剂,随后证明膜连蛋白 A2 与大量蛋白和非蛋白伴侣相互作用,包括纤丝状肌动蛋白、血影蛋白、SNARE 复合体、RNA 和病毒颗粒 (4,6,8,9)。经证明膜连蛋白 A2 还有受体样活性,可在巨噬细胞和血管内皮细胞表面检测到,并分别介导巨噬细胞激活和凝血因子 Xa 信号转导 (10-13)。细胞表面膜连蛋白 A2 上调能通过 Src 磷酸化 Tyr23 进行调节 (14-18)。有趣的是,最近已证明细胞表面膜联蛋白 A2 的表达需要 Tyr23 磷酸化,在细胞表面,膜连蛋白 A2 介导某些胰腺癌细胞的运动性、侵犯以及整体转移潜能 (19,20)。膜连蛋白 A2 经证明还能在 PKC 激活后通过多效机制在丝氨酸残基被高度磷酸化 (21-23)。如需了解膜连蛋白 A2 磷酸化位点的完整列表,请访问 www.phosphosite.org PhosphoSitePlus®。
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