产品说明
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit 提供一种性价比高的方法来检测 AMPK 的总磷酸化底物。该试剂盒包含足够抗体,每种一抗可用于两次蛋白质印迹实验。
特异性/灵敏度
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit 中的每种抗体可检测其靶蛋白的内源水平。Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 和
AMPKα (D5A2) Rabbit mAb 可检测催化亚基的 α1 和 α2 同工型。仅当小鼠 ULK1 的 Ser555(相当于人 ULK1 的 Ser556 )发生磷酸化时,Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 才能检测 ULK1 的内源水平。在 90 和 100 kDa 之间检测到未知来源的条带。Phospho-Raptor (Ser792) Antibody 可检测各种分子量的非特异性信号。Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb 可检测 Ser93 和 Ser96 双重磷酸化,但在较大程度上能检测 Ser93 单磷酸化。该抗体也可微弱检测分子量大小约为 70 kDa 的未知条带。
来源/纯化
使用合成肽以及与人 AMPKα 蛋白的 Ser172、人 AMPKα 蛋白的 Arg21、小鼠 ULK1 蛋白的 Ser555(相当于人 ULK1 的 Ser556)、人 ULK1 的 Arg600、人 Raptor 的 Glu11、人 Beclin-1 的 Ser93(小鼠中的 Ser91)和人 Beclin-1 的 Thr72 周围的残基相对应的磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 raptor 中 Ser792 周围序列相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。抗体经肽亲和层析进行纯化。
背景
AMP 激活的蛋白激酶 (AMPK) 从酵母到植物和动物中都高度保守,且在调节能量平衡方面发挥关键作用 (1)。AMPK 蛋白以一种异三聚体复合体的形式存在,由一个 α-催化亚基、一个 β-调节亚基和一个 γ-调节亚基组成,每个亚基被两到三个不同基因编码 (α1、2;β1、2;γ1、2、3) (2)。该激酶会被因细胞和环境压力引起AMP/ ATP 比值升高而激活,如热休克,缺氧和缺血 (1)。抑癌基因 LKB1 与辅助蛋白 STRAD 和 MO25 一同将位于活化环里 Thr172 位点的 AMPKα 磷酸化,该位点的磷酸化是 AMPK 激酶活性所必需的 (3-5)。
AMPK 会磷酸化许多调控细胞进程(如代谢、细胞生长和自噬)的靶标 (6)。它会抑制哺乳动物 rapamycin 靶标 (mTOR) 的活性,mTOR 在促进细胞生长方面发挥关键作用。mTOR (Raptor) 的调节相关蛋白被确认为可介导 mTOR 信号转导至下游靶标的 mTOR 结合配偶体 (7,8)。Raptor 通过其 TOR 信号转导 (TOS) 基序与 mTOR 底物(包括 4E-BP1 和 p70 S6 激酶)结合,并且是 mTOR 介导这些底物磷酸化所需的 (9,10)。AMPK 直接磷酸化 Raptor Ser722/Ser792,这种磷酸化是抑制含 raptor 的 mTOR 复合体 1 (mTORC1) 所必需的,并在细胞经受能量应激时诱导细胞周期停滞 (11)。AMPK 还通过直接磷酸化 ULK1 来促进自噬 (11,12)。ULK1 是自噬体起始和形成所必需的一种丝氨酸/苏氨酸激酶。在营养不足情况下被激活的 AMPK 可直接磷酸化多个位点的 ULK1,包括 Ser317、Ser555 和 Ser777 (11,12)。相反,作为细胞生长的调节分子和自噬的抑制蛋白, mTOR 可磷酸化 ULK1 Ser757,并破坏 ULK1 和 AMPK 之间的相互作用 (11)。AMPK 还直接磷酸化 Beclin-1,Beclin-1 是自噬体形成期间 ULK1 下游复合体的组分,能够激活 III 类磷脂酰肌醇-3 激酶 VPS34。AMPK 会磷酸化人 Beclin-1 Ser93 和 Ser96 残基,这些残基对应于小鼠 Ser91 和 Ser94 (14)。
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通路与蛋白质
探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。
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