查看特别推荐 >>
35277
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合
  1. 产品
  2. 一抗
  3. AMPK Substrate Antibody Sampler Kit

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit #35277

引用 (0)
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb (上图) 和 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb #3495(下图)，对未经处理 (-) 或已经羰基氰化物 -3- 氯苯腙 (CCCP，100μM，2小时; +) 处理的 MCF7 和 KARPAS-299 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。细胞系来源：剑桥大学的 Abraham Karpas 博士。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 Phospho-Raptor (Ser792) Antibody（左上和下）或 Raptor Antibody #2280（右上和下）对未经处理或经 AICAR（0.5 mM，30 分钟）或 oligomycin（0.5 μM，30 分钟）处理的 C2C12 或 293 细胞进行蛋白质印迹分析。

200 kDa 的交叉反应条带*。

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Raptor (24C12) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb（上图）或 AMPKα (D63G4) Rabbit mAb #5832（下图），对未经 (-) 或已经苯乙双胍（5 mM，1 小时；+）处理的血清饥饿 NCI-H2228 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 AMPKα (D5A2) Rabbit mAb 对 HeLa、K-562、C6 和 Neuro-2a 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 对未处理的或经 oligomycin #9996（0.5 μM，持续30 分钟）处理的 MCF7 细胞提取物，以及未处理的或经过氧化氢（10 mM，持续5分钟）处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 8
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb (上图) 和 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb #3495(下图)，对未经处理 (-) 或经羰基氰化物-3-氯苯腙 (CCCP，100 μM，2小时; +) 处理及转染空载 (-) 或转染表达全长人 Beclin-1 (hBeclin-1; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 Phospho-Raptor (Ser792) Antibody（上）或 Raptor Antibody #4978（下）对未经处理或经 AICAR（2 mM，1 小时）处理的野生型 (WT) 以及 AMPKα1 和 α2 敲除 (KO) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 进行蛋白质印迹分析。（图像由 Salk 生物研究所的 Reuben Shaw 博士提供）。

60、70 和 240 kDa 的交叉反应条带*。

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 12
使用 Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb #3495（上）或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125（下）对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® Beclin-1 siRNA I #6222 (+) 或 SignalSilence® Beclin-1 siRNA II (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb 可确认 Beclin-1 的表达沉默，而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用作观察上样量和 Beclin-1 siRNA 的特异性。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对未经（左图）或已经苯乙双胍（右图）处理的石蜡包埋的 NCI-H2228 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 14
使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb（左图）对未处理的或经 oligomycin #9996（0.5 µM，持续30 分钟）处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。使用磷酸化（中间图）或在 ULK1 的 Ser555 周围区域的非磷酸化肽（右图）来预孵育抗体，从而证实磷酸化的特异性。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对野生型 MEF 和 ULK1 (-/-) MEF 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。MEF 细胞由 Reuben Shaw 博士 (Salk Institute, La Jolla, CA) 惠赠。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP®Isotype Control #3900(泳道2) 或 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb (泳道3)，对经羰基氰化物 3- 氯苯基二腙 (CCCP) 处理的 KARPAS-299 细胞 (100μM，2小时) 中的 phospho-Beclin-1 (Ser93) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb#3678作为二抗，避免与 IgG 重链交叉反应。细胞系来源：剑桥大学的 Abraham Karpas 博士。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对对照品（左图）或经 λ 磷酸酶处理（右图）的石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 18
使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb（上图）或 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb #8054（下图）对未处理的 (-) 或经羰基氰化物3-氯苯腙(CCCP)（100 μM，持续2 小时； +）处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢癌细胞进行免疫组织化学分析。
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit: Image 20
在有对照肽（左图）或抗原特异性肽（右图）的情况下，使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
图像库
了解关于我们如何获得图像方面的更多信息
To Purchase # 35277T
目录# 规格 价格 库存
35277T		 1 个试剂盒（8 x 20 微升）

定制制剂

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 50081 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
 H M R 62 兔 IgG
AMPKα (D5A2) Rabbit mAb 5831 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk B 62 兔 
Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 5869 20 µl
  • WB
  • IP
 H M 140-150 兔 IgG
ULK1 (D8H5) Rabbit mAb 8054 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 150 兔 IgG
Phospho-Raptor (Ser792) Antibody 2083 20 µl
  • WB
 H M R 150 兔 
Raptor (24C12) Rabbit mAb 2280 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 150 兔 
Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 3495 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 60 兔 IgG
Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb 14717 20 µl
  • WB
  • IP
 H 60 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 山羊 

产品说明

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit 提供一种性价比高的方法来检测 AMPK 的总磷酸化底物。该试剂盒包含足够抗体，每种一抗可用于两次蛋白质印迹实验。

特异性/灵敏度

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit 中的每种抗体可检测其靶蛋白的内源水平。Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 和
AMPKα (D5A2) Rabbit mAb 可检测催化亚基的 α1 和 α2 同工型。仅当小鼠 ULK1 的 Ser555（相当于人 ULK1 的 Ser556 ）发生磷酸化时，Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 才能检测 ULK1 的内源水平。在 90 和 100 kDa 之间检测到未知来源的条带。Phospho-Raptor (Ser792) Antibody 可检测各种分子量的非特异性信号。Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb 可检测 Ser93 和 Ser96 双重磷酸化，但在较大程度上能检测 Ser93 单磷酸化。该抗体也可微弱检测分子量大小约为 70 kDa 的未知条带。

来源/纯化

使用合成肽以及与人 AMPKα 蛋白的 Ser172、人 AMPKα 蛋白的 Arg21、小鼠 ULK1 蛋白的 Ser555（相当于人 ULK1 的 Ser556）、人 ULK1 的 Arg600、人 Raptor 的 Glu11、人 Beclin-1 的 Ser93（小鼠中的 Ser91）和人 Beclin-1 的 Thr72 周围的残基相对应的磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 raptor 中 Ser792 周围序列相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。抗体经肽亲和层析进行纯化。

背景

AMP 激活的蛋白激酶 (AMPK) 从酵母到植物和动物中都高度保守，且在调节能量平衡方面发挥关键作用 (1)。AMPK 蛋白以一种异三聚体复合体的形式存在，由一个 α-催化亚基、一个 β-调节亚基和一个 γ-调节亚基组成，每个亚基被两到三个不同基因编码 (α1、2；β1、2；γ1、2、3) (2)。该激酶会被因细胞和环境压力引起AMP/ ATP 比值升高而激活，如热休克，缺氧和缺血 (1)。抑癌基因 LKB1 与辅助蛋白 STRAD 和 MO25 一同将位于活化环里 Thr172 位点的 AMPKα 磷酸化，该位点的磷酸化是 AMPK 激酶活性所必需的 (3-5)。
AMPK 会磷酸化许多调控细胞进程（如代谢、细胞生长和自噬）的靶标 (6)。它会抑制哺乳动物 rapamycin 靶标 (mTOR) 的活性，mTOR 在促进细胞生长方面发挥关键作用。mTOR (Raptor) 的调节相关蛋白被确认为可介导 mTOR 信号转导至下游靶标的 mTOR 结合配偶体 (7,8)。Raptor 通过其 TOR 信号转导 (TOS) 基序与 mTOR 底物（包括 4E-BP1 和 p70 S6 激酶）结合，并且是 mTOR 介导这些底物磷酸化所需的 (9,10)。AMPK 直接磷酸化 Raptor Ser722/Ser792，这种磷酸化是抑制含 raptor 的 mTOR 复合体 1 (mTORC1) 所必需的，并在细胞经受能量应激时诱导细胞周期停滞 (11)。AMPK 还通过直接磷酸化 ULK1 来促进自噬 (11,12)。ULK1 是自噬体起始和形成所必需的一种丝氨酸/苏氨酸激酶。在营养不足情况下被激活的 AMPK 可直接磷酸化多个位点的 ULK1，包括 Ser317、Ser555 和 Ser777 (11,12)。相反，作为细胞生长的调节分子和自噬的抑制蛋白， mTOR 可磷酸化 ULK1 Ser757，并破坏 ULK1 和 AMPK 之间的相互作用 (11)。AMPK 还直接磷酸化 Beclin-1，Beclin-1 是自噬体形成期间 ULK1 下游复合体的组分，能够激活 III 类磷脂酰肌醇-3 激酶 VPS34。AMPK 会磷酸化人 Beclin-1 Ser93 和 Ser96 残基，这些残基对应于小鼠 Ser91 和 Ser94 (14)。
  1. Hardie, D.G. (2004) J Cell Sci 117, 5479-87.
  2. Carling, D. (2004) Trends Biochem Sci 29, 18-24.
  3. Hawley, S.A. et al. (1996) J Biol Chem 271, 27879-87.
  4. Lizcano, J.M. et al. (2004) EMBO J 23, 833-43.
  5. Shaw, R.J. et al. (2004) Proc Natl Acad Sci U S A 101, 3329-35.
  6. Mihaylova, M.M. and Shaw, R.J. (2011) Nat Cell Biol 13, 1016-23.
  7. Hara, K. et al. (2002) Cell 110, 177-89.
  8. Kim, D.H. et al. (2002) Cell 110, 163-75.
  9. Beugnet, A. et al. (2003) J Biol Chem 278, 40717-22.
  10. Nojima, H. et al. (2003) J Biol Chem 278, 15461-4.
  11. Gwinn, D.M. et al. (2008) Mol Cell 30, 214-26.
  12. Kim, J. et al. (2011) Nat Cell Biol 13, 132-41.
  13. Egan, D.F. et al. (2011) Science 331, 456-61.
  14. Kim, J. et al. (2013) Cell 152, 290-303.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意，否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件，除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受， 否书均被拒书，并且无效。

专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明， 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的， 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专，且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的， 或专专售（专独或作专专成）或其他商专目的而专专专品，均需要 CST 的专独专可。客专：(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品，或使用专品制造任何商专专品，(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专，或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专， (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专，(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品， (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink