反应性 | H M R Mk |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 45-48 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与人 ALKBH5 蛋白中 Gly142 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
N6-甲基腺苷(m6A)是一种丰富且可逆的 RNA 修饰,在 mRNA 剪接、处理和稳定性中发挥重要作用。m6A 的去甲基化是通过两种酶进行的,即脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)和 AlkB 同源物 5(ALKBH5)。ALKBH5 属于 Fe(II)和 2-氧代戊二酸酯依赖性双加氧酶的 AlkB 亚家族,并特异性识别保守结合口袋中的 m6A 修饰(1)。已经显示出 ALKBH5 敲除小鼠是可行的,但是在精子发生中具有缺陷,这主要是由于精母细胞中普遍的凋亡(2)。具体而言,ALKBH5 是精子发生后期减数分裂和单倍体阶段所必需的,而 m6A 去除的缺失会损害关键减数分裂基因的表达所必需的 mRNA 剪接和稳定性(3)。已经显示 ALKBH5 表达在乳腺癌的低氧模型中升高,导致 NANOG mRNA 的 m6A 去甲基化增加,并因此促进乳腺癌干细胞的 NANOG 蛋白表达和积累增加(4)。敲低 ALKBH5 已显示出会削弱 MDA-MB-231 乳腺癌细胞中的肿瘤形成,并且对 ALKBH5 的抑制还可以抑制胶质母细胞瘤干样细胞的肿瘤发生(4-5)。有趣的是,ALKBH5 也可能显示出作为胰腺癌的新型生物标志物的希望,其中表达的增加与更高的总生存率相关(6)。
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