产品货号 | 规格 | 价格 | 库存 |
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5203T | 20 µl | ||
5203S | 100 µl |
为庆祝中国农历新年,我们的中国办事处将于2021年2月11日至2021年2月20日关闭。
感谢您的耐心等待。
反应性 | H M R |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 149 (H),130 (M),121 (R) |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:50 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:50 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用蛋白 A 磁珠分离法对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
强烈建议进行细胞裂解物预清除步骤,以减少结合 Protein A Magnetic beads 的非特异性蛋白。为检测样品和同型对照预澄清足够裂解物。
重要提示:使用前,预先洗涤 #73778 磁珠:
一旦溶液变澄清,便小心清除缓冲液。添加 500 μl 1X 细胞裂解缓冲液到磁珠沉淀物中,稍微涡旋以洗涤珠子。将试管放回磁分离架。一旦溶液变澄清,便清除缓冲液。再次进行洗涤步骤。
重要提示:最佳裂解物浓度将取决于目的蛋白的表达水平。建议起始浓度为 250 μg/ml-1.0 mg/ml。
重要提示:强烈建议使用相应的同型对照,以便在你的一抗免疫沉淀中显示特异性结合。使用 Normal Rabbit IgG #2729、Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 和 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 分别进行兔多克隆一抗、兔单克隆一抗和小鼠单克隆一抗的对照检测。同型对照的浓度应匹配,并与一抗样品同时进行。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链 (~50 kDa) 产生的遮盖作用,我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb (#45262) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP 缀合物 #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:410
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布于 2010 年 12 月
实验步骤编号:3
AKAP1(D9C5) XP® Rabbit mAb 可识别 AKAP1 总蛋白的内源水平。
人, 小鼠, 大鼠
通过采用与人 AKAP1 蛋白的 Val630 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
AKAP(A-激酶锚定蛋白),如其名称暗示,属于支架蛋白家族,可结合蛋白激酶 A (PKA) 调节性亚基,并进而将 PKA 活性定位至细胞的不同区域 (1)。除了负责募集 PKA 调节亚基(RIα、RIIα、RIβ 或 RIIβ)的共同两亲性 α 螺旋外,各个 AKAP 含有负责募集额外信号转导蛋白(磷酸二酯酶、磷酸酶、细胞骨架组分、其他激酶等)或将 AKAP 限至特定亚细胞定位的额外结构域 (1)。AKAP1,在人体中称作 AKAP149,在大鼠中称作 AKAP121 或在小鼠中称作 D-AKAP,是可以与 PKA 的 RI 亚基和 RII 亚基以相似亲和力结合的双特异性 AKAP (2,3)。最初认为,AKAP1 主要限于在线粒体中存在,然而日益增长的证据表明,其定位可能部分地受选择性剪切事件调节并且 AKAP1 可能存在于内质网-胞核包膜网络中 (4-6)。核周定位,以及 AKAP1 借助一个双核苷酸结合结构域(K 同源性 (KH) 和 Tudor)与 RNA 相互作用,根据这些事实,有人据此提出 AKAP1 可能在 RNA 代谢中发挥作用 (7,8)。除 PKA-RI 和 -RII 之外,AKAP1 还以磷酸化依赖性方式与 PP1 直接相互作用,并且成为含有 PP2Ac、PKA 和 RSK1 的复合体的核心,该复合体可调节 RSK1 定位和活性 (9-12)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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