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40487
ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
一抗
单克隆抗体
R
重组

ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb #40487

引用 (0)
筛选器:
  1. WB
  2. IHC
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Western blot analysis of extracts from HuH-7, SU-DHL-4, and KYSE-70 cells using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb (upper) or GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 (lower). Lower expression of ACBP/DBI protein in KYSE-70 cells is consistent with the predicted expression pattern.
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Western blot analysis of extracts from 293T cells, mock transfected (-) or transfected with a construct expressing Myc/DDK-tagged human ACBP/DBI protein (hACBP/DBI-Myc/DDK; +), using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb (upper), Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278 (middle), or GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 (lower).
Immunohistochemistry Image 1: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human papillary thyroid carcinoma using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
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Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human B-cell non-Hodgkin lymphoma using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
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Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human colon carcinoma using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
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Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human hepatocellular carcinoma using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 5: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded normal human esophagus using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
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Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded normal human prostate using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.

Immunohistochemistry Image 7: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded normal human pancreas using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 8: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded normal human lung using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 9: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded Renca syngeneic tumor using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 10: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse small intestine using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 11: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse lung using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 12: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse liver using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 13: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse kidney using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 14: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse brown fat using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 15: ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded normal human skin (left), normal kidney (middle), or esophageal carcinoma (right) using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb (top) or ACBP/DBI (E6K8G) XP® Rabbit mAb #45365 (bottom). These two antibodies detect unique epitopes on human ACBP/DBI protein. 使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
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Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human prostate adenocarcinoma using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb (left) compared to concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (right).
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Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded HuH-7 cell pellet (left, high-expressing) or KYSE-70 cell pellet (right, low-expressing) using ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb.
To Purchase # 40487S
目录# 规格 价格 库存
40487T
20 µl
40487S
100 µl

支持性数据

反应性 H M R
灵敏度 内源性
MW (kDa) 10
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
蛋白质印迹法 1:1000
免疫组织化学(石蜡) 1:500 - 1:2000

保存

在 10 mM HEPES 钠 (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中供应。-20℃ 保存。切勿分装抗体。‭

实验步骤

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蛋白质印迹法实验步骤

为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。

注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。

A. 溶液与试剂

从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):(#9808) 若要制备 1 L 1X PBS:将 50 ml 20X PBS 添加至 950 ml dH2O,混合。
  2. 10 X Tris 缓冲盐水 (TBS):(#12498) 若要配制 1 L 1X TBS:将 100 ml 10X 添加至 900 ml dH2O ,混合。
  3. 1X SDS 样品缓冲液:Blue Loading Pack (#7722) 或 Red Loading Pack (#7723) 通过将 1/10 体积的 30X DTT 添加至 1 体积的 3X SDS 样品缓冲液,配制新鲜的 3X 还原性上样缓冲液。用 dH2O 稀释至 1X。
  4. 10X Tris-Glycine SDS 电泳缓冲液:(#4050) 若要配制 1 L 1X 电泳缓冲液: 将100 ml 10X 电泳缓冲液添加至 900 ml dH2O ,混合。
  5. 10X Tris-Glycine 转移缓冲液:(#12539) 要制备 1 L 1X 转移缓冲液:将 100 ml 10X 转移缓冲液添加至 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中,并混合。
  6. 含有 Tween® 20 (TBST) 的 10 X Tris 盐缓冲液:(#9997) 要制备 1 L 1X TBST: 将 100 ml 10X TBST 添加至 900 ml dH2O 中并混合。
  7. 脱脂奶粉:(#9999)。
  8. 封闭缓冲液:含 5% w/v 脱脂奶粉的 1X TBST;要制备 150 ml,将 7.5 g 脱脂奶粉添加至 150 ml 1X TBST 中并充分混匀。
  9. 洗涤缓冲液:(#9997) 1X TBST。
  10. 牛血清白蛋白 (BSA): (#9998)。
  11. 一抗稀释缓冲液:含 5% BSA 的 1X TBST;要制备 20 ml,添加 1.0 g BSA 至 20 ml 1X TBST,然后充分混匀。
  12. Biotinylated Protein Ladder Detection Pack:(#7727)。
  13. Blue Prestained Protein Marker, Broad Range (11-250 kDa): (#59329)。
  14. 印迹膜:(#12369) 本实验步骤针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常推荐 0.2 µm 孔径。
  15. HRP 偶联二抗:Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody (#7074)。
  16. 检测试剂:SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。

B. 蛋白质印迹

制备样品的常规流程。

  1. 添加含有调节因子的新鲜培养基,使其对细胞进行处理一段时间。
  2. 从培养物中吸出培养基;用 1X PBS 洗涤细胞;吸出。
  3. 加入 1X SDS 样品缓冲液(6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径的平板 500 µl)来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移至微量离心管。置于冰上。
  4. 超声处理 10–15 秒以完成细胞裂解并剪切 DNA(以降低样品粘度)。
  5. 取 20 µl 样品,在 95–100°C 下加热 5 分钟;放在冰上冷却。
  6. 微量离心机内离心 5 分钟。
  7. 上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。

    注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。

  8. 电转至硝酸纤维素膜 (#12369)。

C. 膜封闭和抗体孵育

注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。

I. 膜封闭

  1. (可选)转移之后,在室温下用 25 ml TBS 将硝酸纤维素膜洗涤 5 分钟。
  2. 将膜置于 25 ml 封闭缓冲液中,在室温下孵育 1 小时。
  3. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。

II. 一抗孵育

  1. 将膜和一抗(按照产品网页中建议的适当稀释度和稀释液)置于 10 ml 一抗稀释缓冲液中在 4°C 下孵育过夜并不时轻轻晃动。
  2. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。
  3. 使用 10 ml 封闭缓冲液稀释 Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody (#7074,按 1:2000 的比例)和 anti-biotin, HRP-linked Antibody (#7075,按 1:1000–1:3000 的比例)用以检测生物素化蛋白标准品。将膜与稀释液一起孵育,在室温下轻轻摇晃孵育 1 小时。
  4. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。
  5. 继续进行检测(D 部分)。

D. 蛋白质检测

使用说明:

  1. 在 TBST 中清洗与膜结合的 HRP (Antibody Conjugate) 三次,持续 5 分钟。
  2. 通过稀释一部分 2X 试剂 A 和一部分 2X 试剂 B(例如:要制备 10 ml,则添加 5 ml 试剂 A 和 5 ml 试剂 B),来制备 1X SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。混匀。
  3. 将底物与膜一起孵育 1 分钟,倒掉多余溶液(膜将保持湿润),然后包裹在塑料中并在 X 线胶片下曝光。

* 避免反复接触皮肤。

发布​时间 2005 年 6 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:10

免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112).
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Rabbit #8114)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 使 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 根据需要在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653
兼容的
色原
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632  

注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​时间 2010 年 2 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:283

特异性/灵敏度

ACBP/DBI (E4V8V) XP® Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total ACBP/DBI protein.

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a recombinant human ACBP/DBI protein.

背景

Acyl-CoA-binding protein (ACBP) binds to long-chain acyl-CoA molecules and regulates lipid metabolism. This protein is also known as diazepam-binding inhibitor (DBI) and binds to the benzodiazepine-binding site of the γ-aminobutyric acid (GABA) type A receptor (GABAAR), regulating its activity (1). ACBP/DBI is highly expressed in glioblastoma and promotes glioblastoma growth by providing long-chain acyl-CoA molecules to mitochondria for fatty acid oxidation. Reduced ACBP/DBI expression leads to slower proliferation of glioblastoma (2,3). In addition, ACBP/DBI is a regulator of neural progenitor and stem cell proliferation in adult mouse neurogenic niches (4,5). Studies show that ACBP/DBI modulates embryonic neurogenesis of excitatory and inhibitory neurons through GABA signaling (6).
  1. Bravo-San Pedro, J.M. et al. (2019) Cell Metab 30, 754-767.e9.
  2. Duman, C. et al. (2019) Cell Metab 30, 274-289.e5.
  3. Bi, J. and Mischel, P.S. (2019) Cell Metab 30, 229-230.
  4. Alfonso, J. et al. (2012) Cell Stem Cell 10, 76-87.
  5. Dumitru, I. et al. (2017) Neuron 94, 125-137.e5.
  6. Everlien, I. et al. (2022) Neuron 110, 3139-3153.e6.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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