反应性 | H M R |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 100 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 α-actinin 4 蛋白的 Ala6 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
α-Actinin 属于细胞骨架蛋白的血影蛋白家族。它最早被确认为肌动蛋白交联蛋白,在每个单体的氨基末端与肌动蛋白结合头形成反向平行同型二聚体。α-actinin 可以与大量参与细胞骨架信号转导的蛋白(包括参与细胞黏附、迁移和免疫细胞靶向的蛋白)相互作用 (1)。α-actinin 与细胞间黏附分子-5 (ICAM-5) 相互作用有助于促进神经突生长 (2)。在成骨细胞中,α-actinin 与整合素相互作用可稳定黏着斑并可能防止细胞凋亡 (3)。细胞骨架 α-actinin 同工型 1 和 4 (ACTN1, ACTN4) 为非肌肉蛋白,存在于应力纤维、黏附位点和细胞间接触、丝状伪足和板状伪足中。肌肉蛋白同工型2 和 3 (ACTN2, ACTN3) 定位于横纹肌的 Z 盘以及平滑肌的致密体和斑块中 (1)。
广泛表达的 α-actinin 4 (ACTN4) 蛋白通常定位于细胞骨架中,但细胞外刺激将促进某些细胞中的核转位 (4)。研究表明,ACTN4 可介导细胞信号转导,并作为转录辅助激活因子调节基因表达 (5,6)。许多癌症中观察到 ACTN4 蛋白的表达增加和 ACTN4 基因扩增,并观察到这与不良预后和转移有关 (7)。相应的ACTN4基因突变导致局灶性节段性肾小球硬化 (FSGS1),这是一种以肾功能减退,蛋白尿和进行性肾衰竭为特征的严重肾病 (8)。
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