反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 450 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:200 - 1:800 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:800 - 1:3200 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
若想获得高质量的免疫荧光图片,请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。
注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2013 年 11 月
实验步骤编号:24
人
使用与人 53BP1 蛋白 Gly1190 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
P53-结合蛋白 1 (53BP1) 初步鉴定为可增强 p53 转录活性的 p53 结合配偶体 (1,2)。53BP1 包括两个与 p53 结合的 BRCA1 羧基末端 (BRCT) 结构域和一个负责与磷酸化组蛋白 H2A.X 结合的独立结构域 (3)。使用可造成 DNA 双链断裂 (DSB) 的电离辐射 (IR) 或拟辐射剂处理细胞后,53BP1 迅速转位至细胞核聚集点 (4,5)。由于这种 DSB 定位及与酵母蛋白 Rad9 的同源性,已经有人提出 53BP1 在 DSB 修复中的作用。已经证实,募集 53BP1 至 DNA 损伤部位与 ATM、NBS1 和DNA-PK 无关 (4), 并且 53BP1 在 DNA 断口处停留需要磷酸化的 H2A.X (6)。在缺少 53BP1 的细胞中,ATM 底物的磷酸化出现减少,表明 53BP1 位于 ATM 的上游 (7)。经证实,53BP1 对 IR 做出反应,在丝氨酸 6、25、29 和 784 位点由 ATM 磷酸化,但是将 53BP1 定位至 DSB 位点不需要这些位点处的磷酸化 (6)。据报道,在有丝分裂停滞的人细胞中,多见 53BP1 在 Ser1618 处的磷酸化 (8)。
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