反应性 | All |
灵敏度 | 转染性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:200 |
DNA 点印迹 | 1:1000 |
重要信息:该实验步骤采用非典型的固定和变性策略,仅某些靶标与之兼容。在适当的情况下,该实验步骤将在特定于产品的网页上的“产品信息”横幅下链接至其经过验证的抗体。
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
注意:所有后续孵育都应在室温(20-25°C)下进行, 除非另有说明。
用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
注意:如果使用荧光素偶联的一抗,则跳转到 C部分,第8步。
适当的复染。
注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括 DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。查看我们的经验证用于免疫荧光分析的细胞染料列表。
发布时间 2015 年 12 月
修订时间 2020 年 12 月
实验步骤编号:865
注:本实验步骤针对使用 96 孔点印迹仪,将片段化、纯化的基因组 DNA(滴定 1000 ng、500 ng、250 ng、125 ng、62.5 ng、31.25 ng 和 15.625 ng) 点样到带正电荷的尼龙膜上。根据 DNA 的来源和类型,抗体检测所需的 DNA 数量不一。在开始之前:
•使用基因组 DNA 纯化实验步骤或试剂盒纯化基因组 DNA,并且超声处理基因组 DNA 以产生 200 和 500 bp 之间的片段。
可以通过含 100 bp DNA 标准品的 1% 琼脂糖凝胶电泳,分析 DNA 片段大小。
• 将一片尼龙膜切割成点印迹多管吸印仪的尺寸。• 用 10x SSc 缓冲液润湿尼龙膜。• 通过在 96 孔点印迹仪中放置尼龙膜并施加真空,使其干燥。
注:由于检测反应的动力学,信号在孵育后最强并且在后续 2 小时内减弱。
发布时间 2015 年 11 月
实验步骤编号:804
预期的所有物种
通过采用 5-甲酰基-2'-脱氧胞嘧啶免疫动物,产生单克隆抗体。
DNA 在胞嘧啶残基的甲基化属于可遗传、表观遗传修饰,对正确调节基因表达、基因组印迹和哺乳动物发育至关重要 (1,2)。5-甲基胞嘧啶是通过两种酶 DNMT3a 和 DNMT3b从头确立的阻抑性表观遗传标记物,并且由 DNMT1 维持 (3, 4)。早先认为,5-甲基胞嘧啶在 DNA 复制期间被动耗尽。然而,后续研究已经证实 Ten-Eleven 转运 (TET) 蛋白 TET1、TET2、和 TET3 可以催化甲基化的胞嘧啶氧化成 5-羟甲基胞嘧啶 (5-hmC) (5)。此外,TET 蛋白还可以氧化 5-hmC 形成 5-甲酰基胞嘧啶 (5-fC) 和 5-羧基胞嘧啶 (5-caC),二者均由胸腺嘧啶-DNA 糖基化酶 (TDG) 切除,从而将胞嘧啶氧化与碱基切除修复通路有效联系,并且支持活跃的胞嘧啶去甲基化 (6,7)。
TET 蛋白介导的胞嘧啶羟甲基化最初在小鼠脑和胚胎干细胞中得到证实 (5, 8)。自此已经在许多组织中发现这种修饰作用,而脑中这种水平最高 (9)。尽管 5-fC 和 5-caC 似乎是短期中间体种类,但越来越多的证据显示, 5-hmC 是具有各种独特功能的不同表观遗传标记物 (10,11)。修饰的碱基本身在体内稳定并且与各种效应分子(包括 MeCP2)相互作用 (11,12)。脑发育期间 5-hmC 的总体水平增加,并且 5-hmC 在启动子区和增强子处富集。另外,在 5-hmC 水平和组蛋白 H3K9 水平与 H3K27 三甲基化水平之间存在反相关性,表明 5-hmC 在基因激活中发挥作用 (12)。在多种癌症(包括髓样白血病和黑色素瘤)中,已经报道 5-hmC 的含量较低 (13,14)。
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