反应性 | H M R |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 27, 28 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 4EHP 蛋白 Ala194周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
真核起始因子 4E (eIF4E) 与 mRNA 帽结构结合以介导翻译起始 (1,2)。eIF4E 与 eIF4G 相互作用,后者是一种能促进 eIF4E 和 eIF4A 装配成 eIF4F 复合体的支架蛋白 (2)。人们认为 eIF4B 可在翻译起始过程中辅助 eIF4F 复合体。一旦被 Erk 和 p38 MAPK 介导的有丝分裂刺激和/或应激刺激激活时,Mnk1 在体内促使 eIF4E 在 Ser209 位点的磷酸化 (3,4)。在小鼠 Mnk1 中,Erk 和 p38 这两个 MAPK 磷酸化位点(Thr197 和 Thr202)对 Mnk1 激酶活性至关重要 (3)。eIF4G 的羧基末端也含有血清刺激的磷酸化位点,包括 Ser1108、Ser1148 和 Ser1192 (5)。PI3 激酶抑制剂 LY294002 和 FRAP/mTOR 抑制剂 rapamycin 可阻断在这些位点的磷酸化。
随后鉴定到一种与 eIF4E 相关的哺乳动物帽结合蛋白,即 4E 同源蛋白 (4EHP) (6)。4EHP 不与 eIF4G 相互作用,因此无法激活翻译 (7)。相反,它能够抑制一部分 mRNA 的翻译 (7)。
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