Name: 4E-BP Antibody Sampler Kit
Brand: Cell Signaling Technology
Availability: InStock

引用 (7)

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 1 — 使用 4E-BP2 Antibody（上）或 4E-BP1 Antibody #9452（下）对来自未处理的或用诺考达唑（100 ng/ml，16 小时）处理的 A673 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。用 λ 磷酸酶 NEB#P0753 （10,000U/ml , 1 小时）对提取物进行处理，以使两种蛋白质去磷酸化。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 2 — 使用 4E-BP1 Antibody #9452（上）和 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Antibody #2855（下）对来自 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且给予氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后，不处理 (-) 或用 100 nM 胰岛素处理 (+) 细胞 30 分钟。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 3 — 使用 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb（上）、Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Antibody #9459（中）和 4E-BP1 Antibody #9452（下）对用 λ 磷酸酶或 20 % FBS（如图所示）处理的 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 4 — 一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO^®，在酶催化分解期间发光。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 5 — 使用 4E-BP1 Antibody #9644（下）和 Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451（上）对来自 293 个细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且给予氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后，不处理 (-) 或用 100 nM 胰岛素处理 (+) 细胞 30 分钟。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 6 — 使用 Phospho-4E-BP1 (Thr70) Antibody（上）或 4E-BP1 Antibody #9452（下）对来自未经处理或经 20% FBS 按照图示分钟数处理的 293 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 7 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb（上图）或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970（下图）对对照的 HeLa 细胞（泳道 1）或 4E-BP1 编码基因出现靶向突变的 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。突变型 HeLa 细胞的 4E-BP1 分子量变化证实了抗体对 4E-BP1 的特异性。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 8 — 使用 4E-BP2 Antibody 或 4E-BP1 Antibody #9452 对细菌表达的 GST-4E-BP1 和来自 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 9 — 使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 10 — 使用 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb（绿色），对经历血清饥饿（最左）；经历血清饥饿并用 U0126#9903（10 μM，2 小时）、LY294002 #9901（50 μM，2 小时）和 Rapamycin #9904（10 nM，2 小时）（中间，左）处理；经历血清饥饿并用 l 磷酸酶（10,000 U/mL，2 小时）（中间，右侧）处理的 293 无意义shRNA细胞和用 U0126#9903（10 μM，2 小时），LY294002 #9901（50 μM，2 小时）和 Rapamycin #9904（10 nM，2 小时）（最右）处理的 293 shRNA 4E-BP1/2 KO 进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 11 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 12 — 使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析，显示胞质定位和核定位。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 13 — 使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) 兔单抗对石蜡包埋的人淋巴瘤进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 14 — 使用与非特异性阴性对照抗体（红色）作对比的 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb，对未经处理（蓝色）或经 λ 磷酸酶处理的（绿色） COS 细胞进行流式细胞分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 15 — 在对照肽（左）或 4E-BP1 blocking peptide #1053（右）存在的情况下，使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 16 — 使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 17 — 使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101（未经处理（左图）或经 LY294002 处理（右图）的石蜡包埋的 LNCaP 细胞）进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 18 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肝细胞癌组织进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 19 — 使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人滤泡性癌（甲状腺）进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 20 — 在对照肽（左）或 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Blocking Peptide #1052（右）的存在下，使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 21 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 22 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 4E-BP1/2 野生型（左）或 4E-BP1 敲除（右）型小鼠脾脏进行免疫组织化学分析。4E-BP 野生型和敲除组织由加拿大麦吉尔大学 Nahum Sonenberg 博士友情提供。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 23 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb（绿色）对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor^®555 phalloidin（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5^® #4084（DNA 荧光染料）。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 24 — 使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb（绿色），对表达非靶向性 shRNA（底部）或靶向 4E-BP1/2 的 shRNA（顶部）的 293 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。为证实磷酸特异性，细胞以 LY294002 #9901、U0126 #9903 和 Rapamycin #9904（50 μM；10 μm；10 nM；2小时）（左）组成的抑制剂混合物处理、胰岛素 (100 nM，30 分钟；中间）刺激、或胰岛素刺激后（右）用λ-磷酸酶处理。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution (#4087)。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 25 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb#9644（绿色），对表达非靶向性 shRNA（左）或靶向 4E-BP1/2 的 shRNA（右）的 293 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4084。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 26 — 使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP^® Isotype Control #3900（虚线）对转染对照 shRNA（绿色）或 4E-BP1-特异性 shRNA（蓝色）的 293 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')₂ Fragment (Alexa Fluor^® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 27 — 使用 Phospho-4E-BP1 (Thr36/46) (236B4) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP^® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（绿色）或已经过 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM、1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')₂ Fragment (Alexa Fluor^® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

图像库

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To Purchase # 9955T

目录#	规格	价格	库存
9955T	1 个试剂盒（6 x 20 微升）

产品包括
相关产品

产品包括	数量	应用	反应性	MW (kDa)	同型
Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 2855	20 µl	WB IHC IF F	H M R Mk Dm	15 to 20	兔 IgG
Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb 4923	20 µl	WB IF F	H M R Mk	15-20	兔 IgG
Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody 9451	20 µl	WB IP	H M R Mk	15 to 20	兔
4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 9644	20 µl	WB IP IHC IF F	H M R Mk	15-20	兔 IgG
4E-BP2 Antibody 2845	20 µl	WB IP IHC	H M R Mk B	15 to 20	兔
Phospho-4E-BP1 (Thr70) Antibody 9455	20 µl	WB IP	H M R Mk	15 to 20	兔
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074	100 µl	WB			山羊

试剂盒使用信息

实验步骤

2845: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法（磁珠）, 免疫组织化学（石蜡）
2855: 蛋白印迹实验, 免疫组织化学（石蜡）, 免疫荧光法, 流式细胞术
4923: 蛋白印迹实验, 免疫荧光法, 流式细胞术
7074: 蛋白印迹实验
9451: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法（琼脂糖）
9455: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法（琼脂糖）
9644: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法（琼脂糖）, 免疫组织化学（石蜡）, 免疫荧光法, 流式细胞术

产品说明

4E-BP Antibody Sampler Kit 为在细胞内部研究帽依赖性翻译调控作用提供了一种经济实惠的方式。试剂盒包含一抗和二抗，可对每种抗体进行 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/灵敏度

Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Rabbit mAb 检测仅在 Thr37 和/或 Thr46 位点磷酸化的 4E-BP1 的内源水平，可以与等效位点磷酸化的 4E-BP2 和 4E-BP3 蛋白发生交叉反应。Nonphospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb 可检测仅在 Thr46 位点去磷酸化的 4E-BP1 的内源水平。这种抗体可以与在等效位点磷酸化的 4E-BP2 和 4E-BP3 发生交叉反应。当 4E-BP1 在 Ser65 位点磷酸化时，Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody 可检测到 4E-BP1 的内源水平，当 4E-BP1在 Ser101 位点磷酸化时，也可被该抗体识别。当 4E-BP1 在 Ser65 位点磷酸化时，Phospho-4E-BP1 (Ser65) (174A9) Rabbit mAb 可检测到 4E-BP1 的内源水平。仅当 4E-BP1 在 Thr70 位点磷酸化时，Phospho-4E-BP1 (Thr70) Antibody 才可检测到 4E-BP1 的内源水平。4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 可检测内源水平的 4E-BP1 总蛋白。4E-BP2 Antibody 可检测总 4E-BP2 的内源水平（这与磷酸化无关），并且不会与 4E-BP1 发生明显交叉反应。

来源/纯化

使用与小鼠 4E-BP1 的 Thr37 和 Thr46 周围的残基、人 4E-BP1 的 Thr46 或人 4E-BP1 的 Ser112 周围的残基对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 4E-BP2 (#2845) 羧基末端处残基对应的合成肽或小鼠 4E-BP1 的 Ser65 (#9451) 和人 4E-BP1 的 Thr70 (#5078) 周围的磷酸肽，对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白 A 和肽亲和色谱纯化多克隆抗体。

背景

翻译抑制蛋白 4E-BP1（也称为 PHAS-1）可通过结合翻译起始因子 eIF4E 抑制帽子结构依赖性翻译。4E-BP1 的高度磷酸化会扰乱这种相互作用，进而导致帽子结构依赖性翻译被激活 (1)。PI3 激酶/Akt 通路和 FRAP/mTOR 激酶均可调节 4E-BP1 活性 (2,3)。多个 4E-BP1 残基在体内被磷酸化 (4)。一般认为FRAP/mTOR 在 Thr37 和 Thr46 的磷酸化虽然不会阻碍 4E-BP1 与 eIF4E的结合，但会引导4E-BP1 后续在 Ser65 和 Thr70 的磷酸化 (5)。
4E-BP2 和 4E-BP3 两者与 4E-BP1 共有高度序列同源性，包括重要的FRAP/mTOR 依赖的磷酸化位点的保守性。初步数据表明，4E-BP2 的磷酸化受调控的方式与 4E-BP1 相似，不过这种蛋白质的磷酸化尚未得到广泛研究 (6)。

通路与蛋白质

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数据库链接

UniProt ID： Q13542 ， Q13541 ， O60516

Entrez-Gene Id: 1979 , 1978 , 8637

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4E-BP Antibody Sampler Kit #9955