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9955
4E-BP Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

4E-BP Antibody Sampler Kit #9955

引用 (3)
4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 1

使用 Phospho-4E-BP1 (Thr36/46) (236B4) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(绿色)或已经过 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903(50 μM、1 μM 和 10 μM,2 小时;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

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使用与非特异性阴性对照抗体(红色)作对比的 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb,对未经处理(蓝色)或经 λ 磷酸酶处理的(绿色) COS 细胞进行流式细胞分析。

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使用 4E-BP1 Antibody #9644(下)和 Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451(上)对来自 293 个细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且给予氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后,不处理 (-) 或用 100 nM 胰岛素处理 (+) 细胞 30 分钟。

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使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb(绿色)对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb(蓝色)对照非特异性阴性对照抗体(红色)对 COS 细胞进行流式细胞分析。

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使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照的 HeLa 细胞(泳道 1)或 4E-BP1 编码基因出现靶向突变的 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。突变型 HeLa 细胞的 4E-BP1 分子量变化证实了抗体对 4E-BP1 的特异性。

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使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析,显示胞质定位和核定位。

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使用 Phospho-4E-BP1 (Thr70) Antibody(上)或 4E-BP1 Antibody #9452(下)对来自未经处理或经 20% FBS 按照图示分钟数处理的 293 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

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一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

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使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb(绿色),对表达非靶向性 shRNA(底部)或靶向 4E-BP1/2 的 shRNA(顶部)的 293 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。为证实磷酸特异性,细胞以 LY294002 #9901、U0126 #9903 和 Rapamycin #9904(50 μM;10 μm;10 nM;2小时)(左)组成的抑制剂混合物处理、胰岛素 (100 nM,30 分钟;中间)刺激、或胰岛素刺激后(右)用λ-磷酸酶处理。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution (#4087)。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 11

使用 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb(绿色),对经历血清饥饿(最左);经历血清饥饿并用 U0126#9903(10 μM,2 小时)、LY294002 #9901(50 μM,2 小时)和 Rapamycin #9904(10 nM,2 小时)(中间,左)处理;经历血清饥饿并用 l 磷酸酶(10,000 U/mL,2 小时)(中间,右侧)处理的 293​ 无意义shRNA细胞和用 U0126#9903(10 μM,2 小时),LY294002 #9901(50 μM,2 小时)和 Rapamycin #9904(10 nM,2 小时)(最右)处理的 293 shRNA 4E-BP1/2 KO 进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 12

使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb#9644(绿色),对表达非靶向性 shRNA(左)或靶向 4E-BP1/2 的 shRNA(右)的 293 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4084。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 13

使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 14

使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 15

使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 16

使用 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb(上)、Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Antibody #9459(中)和 4E-BP1 Antibody #9452(下)对用 λ 磷酸酶或 20 % FBS(如图所示)处理的 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 17

使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人滤泡性癌(甲状腺)进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 18

使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) 兔单抗对石蜡包埋的人淋巴瘤进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 19

在对照肽(左)或 4E-BP1 blocking peptide #1053(右)存在的情况下,使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 20

使用 4E-BP2 Antibody(上)或 4E-BP1 Antibody #9452(下)对来自未处理的或用诺考达唑(100 ng/ml,16 小时)处理的 A673 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。用 λ 磷酸酶 NEB#P0753 (10,000U/ml , 1 小时)对提取物进行处理,以使两种蛋白质去磷酸化。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 21

在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 (石蜡包埋的未经处理(左)或经 LY294002 处理(右) 的LNCaP 细胞)上使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。

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使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肝细胞癌组织进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 23

使用 4E-BP2 Antibody 或 4E-BP1 Antibody #9452 对细菌表达的 GST-4E-BP1 和来自 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 24

在对照肽(左)或 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Blocking Peptide #1052(右)的存在下,使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

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使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 26

使用 4E-BP1 Antibody #9452(上)和 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Antibody #2855(下)对来自 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且给予氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后,不处理 (-) 或用 100 nM 胰岛素处理 (+) 细胞 30 分钟。

4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 27

使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 4E-BP1/2 野生型(左)或 4E-BP1 敲除(右)型小鼠脾脏进行免疫组织化学分析。4E-BP 野生型和敲除组织由加拿大麦吉尔大学 Nahum Sonenberg 博士友情提供。

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1 个试剂盒(6 x 20 µl)

产品说明

4E-BP Antibody Sampler Kit 为在细胞内部研究帽依赖性翻译调控作用提供了一种经济实惠的方式。试剂盒包含一抗和二抗,可对每种抗体进行 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Rabbit mAb 检测仅在 Thr37 和/或 Thr46 位点磷酸化的 4E-BP1 的内源水平,可以与等效位点磷酸化的 4E-BP2 和 4E-BP3 蛋白发生交叉反应。Nonphospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb 可检测仅在 Thr46 位点去磷酸化的 4E-BP1 的内源水平。这种抗体可以与在等效位点磷酸化的 4E-BP2 和 4E-BP3 发生交叉反应。当 4E-BP1 在 Ser65 位点磷酸化时,Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody 可检测到 4E-BP1 的内源水平,当 4E-BP1在 Ser101 位点磷酸化时,也可被该抗体识别。当 4E-BP1 在 Ser65 位点磷酸化时,Phospho-4E-BP1 (Ser65) (174A9) Rabbit mAb 可检测到 4E-BP1 的内源水平。仅当 4E-BP1 在 Thr70 位点磷酸化时,Phospho-4E-BP1 (Thr70) Antibody 才可检测到 4E-BP1 的内源水平。4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 可检测内源水平的 4E-BP1 总蛋白。4E-BP2 Antibody 可检测总 4E-BP2 的内源水平(这与磷酸化无关),并且不会与 4E-BP1 发生明显交叉反应。

来源/纯化

使用与小鼠 4E-BP1 的 Thr37 和 Thr46 周围的残基、人 4E-BP1 的 Thr46 或人 4E-BP1 的 Ser112 周围的残基对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 4E-BP2 (#2845) 羧基末端处残基对应的合成肽或小鼠 4E-BP1 的 Ser65 (#9451) 和人 4E-BP1 的 Thr70 (#5078) 周围的磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白 A 和肽亲和色谱纯化多克隆抗体。

背景

翻译抑制蛋白 4E-BP1(也称为 PHAS-1)可通过结合翻译起始因子 eIF4E 抑制帽子结构依赖性翻译。4E-BP1 的高度磷酸化会扰乱这种相互作用,进而导致帽子结构依赖性翻译被激活 (1)。PI3 激酶/Akt 通路和 FRAP/mTOR 激酶均可调节 4E-BP1 活性 (2,3)。多个 4E-BP1 残基在体内被磷酸化 (4)。一般认为FRAP/mTOR 在 Thr37 和 Thr46 的磷酸化虽然不会阻碍 4E-BP1 与 eIF4E的结合,但会引导4E-BP1 后续在 Ser65 和 Thr70 的磷酸化 (5)。

4E-BP2 和 4E-BP3 两者与 4E-BP1 共有高度序列同源性,包括重要的FRAP/mTOR 依赖的磷酸化位点的保守性。初步数据表明,4E-BP2 的磷酸化受调控的方式与 4E-BP1 相似,不过这种蛋白质的磷酸化尚未得到广泛研究 (6)。

  1. Pause, A. et al. (1994) Nature 371, 762-7.
  2. Brunn, G.J. et al. (1997) Science 277, 99-101.
  3. Gingras, A.C. et al. (1998) Genes Dev 12, 502-13.
  4. Fadden, P. et al. (1997) J Biol Chem 272, 10240-7.
  5. Gingras, A.C. et al. (1999) Genes Dev 13, 1422-37.
  6. Lin, T.A. and Lawrence, J.C. (1996) J. Biol. Chem. 271, 30199-30204.

通路和蛋白

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