反应性 | H M R Mk Pg |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 27 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
人, 小鼠, 大鼠, 猴, 猪
鸡 , 非洲爪蟾蜍, 斑马鱼
通过使用与人 14-3-3 γ 蛋白 Ile79 周围的残基对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
14-3-3 家族蛋白在信号转导、检查点控制、凋亡和营养感应通道 (1,2) 中起到关键调节作用。14-3-3 蛋白高度保守且表达广泛。已经在哺乳动物内发现了至少 7 个亚型 β、γ、ε、σ、ζ、τ 和 η。最初发现的 α 和 δ 亚型已经证明分别是 β 和 ζ 亚型的磷酸化形式 (3)。通过它们的氨基末端 α 螺旋区域,14-3-3 蛋白可形成同源或异源二聚体,这些二聚体与包括转录因子、新陈代谢酶、细胞支架蛋白、激酶、磷酸化酶在内的很多蛋白质和其它信号分子发生相互作用 (3,4)。14-3-3 蛋白和其他靶标蛋白间的相互作用主要是通过一个磷酸化的丝氨酸/苏氨酸基序完成的。但是,据观察该蛋白也能够和不同的磷酸化丝氨酸/苏氨酸基序结合,以及呈现磷酸化非依赖性的相互作用 (4)。14-3-3 的结合会遮蔽掉靶标蛋白的特殊序列进而影响靶标蛋白的定位,磷酸化状态,稳定性和分子间相互作用 (1-4)。14-3-3 蛋白也可诱导靶标蛋白的构象变化以影响靶标蛋白的功能 (4,5)。在发育和应对细胞外信号和药物的急性反应期发现了不同 14-3-3 蛋白亚型的时空表达模式,表明尽管 14-3-3 蛋白亚型的序列相似,它们可能具有不同的功能 (4)。若干研究表明 14-3-3 亚型在癌症和神经性疾病中受到不同的调控 (2,3)。
探索与本品相关的通路。
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