反应性 | H |
产品信息
1. 标记适量与要使用的实时 PCR 仪器型号相适应的相应 PCR 试管或 PCR 平板数量。PCR 反应(的每一个样品)应以重复一次的方式进行,并应包含一只不含 DNA 且用于观察污染的试管,以及梯度稀释的 2% 总输入染色质 DNA(未稀释、1:5、1:25、1:125)以用于生成标准曲线并确定扩增效率。2. 向每只试管或 PCR 平板的每个孔添加 2 μl 相应 ChIP DNA 样品。
3. 按下文所述制备主 PCR 反应混合物。额外足量配置两个反应的试剂以弥补分管时的体积损失。向每只PCR 反应试管或 PCR 平板的每个孔添加 18 μl 主 PCR 反应混合物。
1 次 PCR 反应的试剂量 (20 μl)
不含核酸酶的 H2O 6 μl
5 μM SimpleChIP® Primers 2 μl
2X SYBR® Green Reaction Mix 10 μl
4. 启动以下 PCR 反应程序:
a. 初始变性:在 95°C 下进行 3 分钟。
b. 变性:在 95°C 下进行 15 秒钟。c. 退火和延伸:在引物特定温度下进行 60 秒钟。
d. 重复步骤 b 和 c,共循环 40 次。
5. 使用实时 PCR 仪器提供的软件分析定量 PCR 结果。
保存在浓度为 5 μM(每种引物的最终浓度为 5 μM)的无核酸酶水中。储存于 -20°C 的温度下。
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