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9860
Senescence β-Galactosidase Staining Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

Senescence β-Galactosidase Staining Kit #9860

引用 (63)
Senescence β-Galactosidase Staining Kit: Image 1

pH 值 为 6 时,对细胞群倍增数为 29(左图)的正常 WI38 细胞以及细胞群倍增数为 36(右图)的衰老 WI38 细胞进行 β-半乳糖苷酶染色。

Senescence β-Galactosidase Staining Kit: Image 2

pH 为 6.0 时,对未处理的 MCF-7 细胞(左图)和经依托泊苷 #2200(12.5 μM,24 小时)处理并恢复 4 天的衰老 MCF-7 细胞(右图)进行 β-半乳糖苷酶染色。

购买 # 9860S
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9860S
1 个试剂盒(125 个 35 mm 孔)

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感谢您的耐心等待。

产品包括 数量(计数)
10X Fixative Solution 1 x 15 ml
10X Staining Solution 1 x 15 ml
100X Solution A 1 x 1.5 ml
100X Solution B 1 x 1.5 ml
X-Gal 1 x 150 mg

实验步骤

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9860衰老 β-半乳糖苷酶细胞染色实验步骤

A. 溶液和试剂

提供的试剂足以染色 125 x 35 mm 孔。

提供的试剂

  1. 10X Fixative Solution #11674
  2. 10X Staining Solution #11675
  3. 100X Solution A #11676
  4. 100X Solution B #11677
  5. X-Gal #11678

其他试剂(未提供)

  1. 1X PBS #
  2. DMF (Dimethylformamide) #12767
  3. 聚丙烯管
  4. 37°C 干燥孵育器(无 CO2
  5. 相差或光学显微镜
  6. 70% 甘油(可选)
  7. DMSO (Dimethyl Sulfoxide) #12611

B. 溶液制备

注意:所有溶液都应现配现用。

体积对应于 6 孔板的一个 35 mm 孔。程序中的体积应大约为组织培养基体积的一半(例如:对于含 2 ml 培养基的 35 mm 孔/板,体积为 1 ml;对于含 5 ml 培养基的 60 mm 板,体积为 2.5 ml;对于含 10 ml 培养基的 100 mm 板,体积为 5 ml)。

  1. PBS:每个 35 mm 孔至少准备 6 ml 1X PBS
  2. 固定溶液:用蒸馏水将 10X Fixative Solution 稀释为 1X 溶液。对于每个 35 mm 孔,您将需要 1 ml 1X 溶液。
  3. 染色溶液:搅动并加热至 37°C 以重新溶解 10X Staining Solution。用蒸馏水将 10X Staining Solution 稀释为 1X 溶液。对于每个 35 mm 孔,您将需要 930 ul 1X 染色溶液。
  4. X-Gal:

    重要事项:始终使用聚丙烯塑料或玻璃容器配制和保存 X-gal 溶液。请勿使用聚苯乙烯容器。

    用 1 ml DMF 溶解 20 mg X-gal 以制备 20 mg/ml 原液。多余的 X-gal 溶液可放在耐光容器中在 -20°C 下保存一个月。

    注意:可使用 DMSO 代替 DMF。

  5. β-半乳糖苷酶染色溶液:对于要染色的每一个 35 mm 孔,将以下物质混合于一个聚丙烯容器中:
    1. 930 µl 1X Staining Solution(参见步骤 3)
    2. 10 µl 100X Solution A
    3. 10 µl 100X Solution B
    4. 50 µl 20 mg/ml X-gal 原液(参见步骤 4)

    重要事项:由于水 pH 的变化,请确保 β-半乳糖苷酶染色溶液的最终 pH 为 6.0(可接受 pH:5.9-6.1)。pH 差异会影响染色:pH 低可导致假阳性,pH 高可导致假阴性。如有必要,分别使用 HCl 或 NaOH 降低或提高 pH。

C. 程序

  1. 去除细胞生长培养基。
  2. 用 1X PBS(一块 35 mm 孔板 2 ml,或与培养基体积匹配的体积)冲洗平板一次
  3. 向每个 35 mm 孔添加 1 ml 1X Fixative Solution。室温下固定细胞 10-15 分钟。
  4. 用 1X PBS 冲洗平板两次(安全停止),或者将平板放置在 1X PBS 中,在 +4°C 下覆盖过夜。
  5. 向每个 35 mm 孔添加 1 ml β-半乳糖苷酶染色溶液(参见溶液制备步骤 5)。
  6. 重要事项:用石蜡膜密封平板以防蒸发。蒸发会导致晶体形成。

  7. 在 37°C 下将平板在干燥孵育器(无 CO2)中孵育至少过夜。
  8. 注意:CO2 的存在可能导致 pH 变化,从而影响染色结果。

  9. 在平板上仍存在 β-半乳糖苷酶的情况下,使用显微镜观察细胞(200X 总放大倍率)中是否出现蓝色。
  10. 如需长期储存平板,去除 β-半乳糖苷酶染色溶液,并使用 70% 甘油覆盖细胞。储存在 4°C。

发布​于 2020 年 8 月 

实验步骤编号:2164

产品说明

Senescence β-Galactosidase Staining Kit 便捷地提供了 pH 为 6 时检测 β-半乳糖苷酶活性所需的试剂,这种活性是衰老细胞的一种已知特性。对细胞和冷冻组织使用该试剂盒的情况已有论文发表。该试剂盒包含进行该检测所需的所有试剂。

背景

复制能力有限是多数正常细胞的一个典型特征,在衰老时达到顶点,细胞处于仍然有活力的停滞状态 (1)。培养物中的血清或传代不会刺激衰老细胞发生分裂,并且衰老会产生特殊的细胞周期特点,此特点有别于多数损伤诱导的停滞进程或接触抑制 (2)。细胞增大、pH 依赖性 β-半乳糖苷酶活性表达 (3) 以及基因表达模式改变 (4,5) 是衰老细胞的进一步特征。

  1. Goldstein, S. (1990) Science 249, 1129-33.
  2. Sherwood, S. W. et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 85, 9086-90.
  3. Dimri, G.P. et al. (1995) Proc Natl Acad Sci U S A 92, 9363-7.
  4. Cristofalo, V. J. et al. (1998) Crit. Rev. Eukaryot Gene Expr. 8, 43-80.
  5. Linskens, M. H. et al. (1995) Nucleic Acid Res. 23, 3244-51.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

产品引用:63

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