HTScan® PKD/PKCμ Kinase Assay Kit

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图 3. PKD/PKCmu 激酶活性的剂量依赖性曲线：使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKD/PKCmu 激酶对底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔在室温下用数量递增的 PKD/PKCmu 和 1.5 µM 底物肽反应 15 分钟。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。

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图 5. Staurosporine 会抑制 PKD/PKCmu 激酶活性：使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKD/PKCmu 激酶对 PKD/PKCmu 底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔在室温下用 10 ng PKD/PKCmu、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 15 分钟。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。

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图 4. PKD/PKCmu 激酶活性的肽浓度依赖性：使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKD/PKCmu 激酶对底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔在室温下用 10 ng PKD/PKCmu 和浓度递增的底物肽反应 15 分钟。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。

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图 2. PKD/PKCmu 激酶活性的时程：使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKD/PKCmu 激酶对 PKD/PKCmu 底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔用 10 ng PKD/PKCmu 和 1.5 µM 底物肽。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 PKD/PKCmu 激酶活性：60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、5 mM MgCl2、1.32 mM CaCl2、1 mM EDTA、1.25 mM EGTA、0.25 μg/50 μl 磷脂酰丝氨酸、50 ng/50 μl 1.2二油酸甘油酯、1.2 mM DTT、ATP（可变）、2.5 µg/50 µl PEG20.000，底物：tetra (LRRWSLG) 0.5 µg/50 µl 和重组 PKD/PKCmu：200 ng/50 µl。

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产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 PKD/PKCmu 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 PKD/PKCmu 激酶（以 GST 融合蛋白的形式保存）、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸/苏氨酸抗体。

MW (kDa)	肽底物，生物素肽：2,326 道尔顿。GST-PKD/PKCmu 激酶结构域：133
分子式	Peptide substrate, Biotin-peptide：2,326 道尔顿。GST-PKD/PKCmu 激酶结构域：133 kDa。

背景

在可引起分泌、基因表达、细胞增殖和肌肉收缩等多种细胞反应的级联中，PKC 激活是该级联中最早期的一个活动 (1,2)。蛋白激酶 D (PKD)（也称 PKCμ）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，可在 PKC 依赖性信号转导通路中通过两个活化环位点 Ser744 和 Ser748 的磷酸化被激活 (3-5)。除了两个活化环位点外，羧基末端 Ser916 位点被发现是 PKD/PKCμ 的一个自磷酸化位点。Ser916 磷酸化与 PKD/PKCμ 的催化活性有关 (6)。

通路和蛋白

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UniProt ID： Q15139

Entrez-Gene Id: 5587

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HTScan® PKD/PKCμ Kinase Assay Kit #7412