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7579
HTScan® PKCα Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® PKCα Kinase Assay Kit #7579

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HTScan® PKCα Kinase Assay Kit: Image 1

图 3. PKCα 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKCα 激酶对底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 PKCα 和 1.5 µM 底物肽反应 15 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 PKCα 激酶活性:使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKCα 激酶对 PKCα 底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 10 ng PKCα、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 15 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. PKCα 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKCα 激酶对底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 10 ng PKCα 和浓度递增的底物肽反应 15 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

HTScan® PKCα Kinase Assay Kit: Image 4

图 2. PKCα 激酶活性的时程:使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS/T) (100G7) Rabbit mAb #9624 检测 PKCα 激酶对 PKCα 底物肽 (#1331) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 10 ng PKCα 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 PKCα 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、1 µM ATP、2.5 µg/50 µl PEG20,000,底物:组蛋白 H1 5 µg/50 µl 和重组 PKCα:25 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 PKCα 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 PKCα 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸/苏氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-CREB (Ser133):2,326 道尔顿。GST-PKCα 激酶:110 kDa。

背景

在调控分泌、基因表达、细胞增殖和肌肉收缩等多个细胞反应的级联中,蛋白激酶 C (PKC) 激活是该级联中最早期的一个活动 (1,2)。根据钙依赖性和激活因子,PKC 同工型属于三个亚家族。典型 PKC 因其 C2 结构域对钙具有依赖性,可通过其半胱氨酸富集 C1 结构域被磷脂酰丝氨酸 (PS)、甘油二酯 (DAG) 和佛波酯 (TPA, PMA) 激活。新型和非典型 PKC 均有钙依赖性,但只有新型 PKC 才能被 PS、DAG 和佛波酯激活 (3-5)。这三个 PKC 亚家族的成员包含一个假底物或自抑制结构域,可结合催化结构域中的底物结合位点,以防止在没有辅因子或激活因子的情况下被激活。PKC 活性的控制通过三个独立的磷酸化事件进行调节。活化环中的 Thr500、Thr641(自磷酸化)以及羧基末端疏水性位点 Ser660 均会发生体内磷酸化 (2)。非典型 PKC 同工型缺乏疏水区域磷酸化,这与谷氨酸的存在有关,与在更典型的 PKC 同工型中发现的丝氨酸或苏氨酸残基无关。PDK1 或相关酶负责 PKC 的激活。PKC 超家族最近新增加的成员是 PKCμ (PKD),它通过其 C1 结构域被 DAG 和 TPA 调控。PKD 的特点是有一个 PH 结构域,它有独特的底物识别和高尔基体定位特征 (6)。PKC 相关激酶 (PRK) 缺少 C1 结构域,并且不对 DAG 或佛波酯产生反应。磷脂酰肌醇脂质激活 PRK,小 Rho 家族 GTP 酶结合同源区域 1 (HR1),可调节 PRK 激酶活性 (7)。

PKCα 由 672 个氨基酸组成并普遍表达。它在调控细胞增殖、凋亡、分化和运动等主要细胞功能方面起到重要作用。PKα 还与胶质瘤和乳腺癌等许多肿瘤的恶性表型有关 (10,11)。

  1. Nishizuka, Y. (1984) Nature 308, 693-8.
  2. Keranen, L.M. et al. (1995) Curr Biol 5, 1394-403.
  3. Mellor, H. and Parker, P.J. (1998) Biochem J 332 ( Pt 2), 281-92.
  4. Ron, D. and Kazanietz, M.G. (1999) FASEB J 13, 1658-76.
  5. Moscat, J. and Diaz-Meco, M.T. (2000) EMBO Rep 1, 399-403.
  6. Baron, C.L. and Malhotra, V. (2002) Science 295, 325-8.
  7. Flynn, P. et al. (2000) J Biol Chem 275, 11064-70.
  8. Nakashima, S. (2002) J. Biochem. (Tokyo) 132, 669-75.
  9. Mackay, H.J. and Twelves, C.J. (2003) Endocr. Relat. Cancer 10, 389-96.

通路和蛋白

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