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7758
HTScan® Lck Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® Lck Kinase Assay Kit #7758

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图 3. Lck 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Lck 激酶对底物肽 #1365 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在 25ºC 下用数量递增的 Lck 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 Lck 激酶活性:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Lck 激酶对 Lck 底物肽 (#1365) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng Lck、1.5 µM 底物肽、50 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. Lck 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Lck 激酶对底物肽 (#1365) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng Lck 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. Lck 激酶活性的时程:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Lck 激酶对 Lck 底物肽 (#1365) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 Lck 激酶活性:5 mM MOPS (pH 7.2)、2.5 mM β-甘油磷酸、1 mM EGTA、0.4 mM EDTA、5 mM MgCl2、0.05 mM DTT、50 μM ATP,底物:Poly (EY 4:1) 400 ng/μL 和可变量的 Lck 激酶。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用活化的人 Lck 激酶进行酶检测。它包含活化的 Lck 激酶(以 GST 融合蛋白的形式提供)、生物素化底物肽以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化酪氨酸单克隆抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-FHIT (Tyr114):2,150 道尔顿;GST-Lck 激酶:84 kDa。

背景

Src 蛋白酪氨酸激酶家族包括 Src、Lyn、Fyn、Yes、Lck、Blk 和 Hck,它们对调节真核细胞的生长和分化发挥重要作用 (1)。Src 活性通过在两个位点的酪氨酸磷酸化进行调节,但具有相反作用。在激酶结构域的活化环中,Tyr416 位点的磷酸化会上调酶活性,而在羧基末端尾区,Csk 在 Tyr527 位点的 磷酸化会降低酶活性 (2)。

Lck 对于 T 淋巴细胞激活和分化十分重要 (3,4)。Tyr505 在 Lck 羧基末端尾区的磷酸化会下调其催化活性,而 Tyr394 的磷酸化则会增强 Lck 活性 (5)。

  1. Thomas, S.M. and Brugge, J.S. (1997) Annu Rev Cell Dev Biol 13, 513-609.
  2. Hunter, T. (1987) Cell 49, 1-4.
  3. Molina, T.J. et al. (1992) Nature 357, 161-4.
  4. Straus, D.B. and Weiss, A. (1992) Cell 70, 585-93.
  5. Chow, L.M. et al. (1993) Nature 365, 156-60.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DELFIA 为 PerkinElmer 公司的注册商标
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