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7549
HTScan® IKKβ Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® IKKβ Kinase Assay Kit #7549

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图 3. IKKβ 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-IkappaB-alpha (Ser32/36) (5A5) Mouse mAb #9246 检测 IKKβ 激酶对底物肽 (#1146) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 IKKβ 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 IKKβ 激酶活性:使用 Phospho-IkappaB-alpha (Ser32/36) (5A5) Mouse mAb #9246 检测 IKKβ 激酶对 IKKβ 底物肽 (#1146) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng IKKβ、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. IKKβ 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-IkappaB-alpha (Ser32/36) (5A5) Mouse mAb #9246 检测 IKKβ 激酶对底物肽 (#1146) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng IKKβ 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. IKKβ 激酶活性的时程:使用 Phospho-IkappaB-alpha (Ser32/36) (5A5) Mouse mAb #9246 检测 IKKβ 激酶对 IKKβ 底物肽 (#1146) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng IKKβ 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 IKKβ 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、2.5 µg/50 µl PEG20.000,底物:Rb CTF 1.5 µg/50 µl,重组 IKKβ:50 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 IKKβ 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 IKKβ 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-peptide:2,085 道尔顿。GST-IKKβ 激酶:87 kDa。

背景

NF-κB/Rel 转录因子以非活性状态存在于细胞质中,并复合了抑制性 IκB 蛋白 (1-3)。大多数物质都是通过基于 IκB 诱导磷酸化、蛋白酶调节降解的共同通路激活 NF-κB (3-7)。本通路的主要调节步骤包括激活高分子量 IκB 激酶 (IKK) 复合体,通常情况下可通过三种紧密结合的 IKK 亚基发挥其催化作用。IKKα 和 IKKβ 可作为激酶的催化亚基, IKKγ 可作为调节亚基 (8,9)。IKK 的激活取决于 IKKβ 激活环中 Ser177 和 Ser181(IKKα 中的 Ser176 和 Ser180)位点的磷酸化,导致其构象发生变化,从而激活激酶 (10-13)。

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  13. Delhase, M. et al. (1999) Science 284, 309-13.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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DELFIA 为 PerkinElmer 公司的注册商标
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