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7746
HTScan® IGF-1 Receptor Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® IGF-1 Receptor Kinase Assay Kit #7746

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图 3. IGF-IR 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 IGF-IR 激酶对底物肽 (#1320) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 IGF-IR 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 IGF-IR 激酶活性:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 IGF-IR 激酶对 IGF-IR 底物肽 (#1320) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng IGF-IR、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. IGF-IR 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 IGF-IR 激酶对底物肽 (#1320) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng IGF-IR 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. IGF-IR 激酶活性的时程:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 IGF-IR 激酶对 IGF-IR 底物肽 (#1320) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng IGF-IR 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 IGF-IR 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、2.5 µg/50 µl PEG20.000,底物:PolyEY 2 µg/50 µl,重组 IGF-IR:20 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 IGF-IR 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 IGF-IR 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化酪氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-peptide:2,005 道尔顿。GST-IGF-IR 激酶:77 kDa。

背景

I 型胰岛素样生长因子受体 (IGF-IR) 是一种跨膜受体酪氨酸激酶,其广泛表达于胎儿和产后组织内的许多细胞系和细胞类型中 (1-3)。IGF-I 和 IGF-II 配体相结合后,随后受体发生自磷酸化。激酶结构域中的三个酪氨酸残基 (Tyr1131,Tyr1135,Tyr1136) 是最早期的主要自磷酸化位点 (4)。这三种酪氨酸残基的磷酸化对于激酶激活十分重要 (5,6)。胰岛素受体 (IR) 与 IGF-I 受体在结构和功能方面显著相似,包括在激酶结构域激活环内存在相当的酪氨酸簇(Tyr1146/1150/1151)。IR 的酪氨酸自磷酸化是对胰岛素刺激产生的最早细胞应答之一 (7)。自磷酸化从 Tyr1146 和 Tyr1150 或 Tyr1151 位点开始磷酸化,同时完全的激酶激活需要三重酪氨酸磷酸化 (8)。

  1. Adams, T.E. et al. (2000) Cell Mol Life Sci 57, 1050-93.
  2. Baserga, R. (2000) Oncogene 19, 5574-81.
  3. Scheidegger, K.J. et al. (2000) J Biol Chem 275, 38921-8.
  4. Hernández-Sánchez, C. et al. (1995) J Biol Chem 270, 29176-81.
  5. Lopaczynski, W. et al. (2000) Biochem Biophys Res Commun 279, 955-60.
  6. Baserga, R. (1999) Exp Cell Res 253, 1-6.
  7. White, M.F. et al. (1985) J Biol Chem 260, 9470-8.
  8. White, M.F. et al. (1988) J Biol Chem 263, 2969-80.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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DELFIA 为 PerkinElmer 公司的注册商标
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