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7716
HTScan® EphB3 Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® EphB3 Kinase Assay Kit #7716

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图 3. EphB3 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) # 9411检测 EphB3 激酶对底物肽 (#1330) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 EphB3 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. EphB3 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) # 9411检测 EphB3 激酶对底物肽 (#1330) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng EphB3 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. EphB3 激酶活性的时程:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) # 9411检测 EphB3 激酶对 EphB3 底物肽 (#1330) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng EphB3 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 EphB3 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、2.5 µg/50 µl PEG20.000,底物:PolyEY 0.5 µg/50 µl,重组 EphB3:25 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 EphB3 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 EphB3 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化酪氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-peptide:2,052 道尔顿。GST-EphB3 激酶:80 kDa。

背景

Eph 受体是已知最大的受体酪氨酸激酶家族 (RTKs)。根据序列相似性和对配体亚群的偏好,可将其分为两组:EphA 受体结合糖基磷脂酰肌醇锚定肝配蛋白 A 配体,而 EphB 受体则结合具有一个跨膜胞质域的肝配蛋白 B (1,2)。研究表明,Eph 受体和配体可能与癌症在内的许多疾病有关 (3)。肝配蛋白 A 和 B 配体均有双重功能。作为 RTK 配体,肝配蛋白可刺激 Eph 受体的激酶活性,激活表达受体细胞的信号转导通路。只要聚集,肝配蛋白的胞外域足以完成这项功能 (4)。肝配蛋白的第二项功能称为“反向信号转导”,在这个过程中,胞质域被酪氨酸磷酸化,能够与在表达配体的细胞中激活信号转导通路的其他蛋白相互作用 (5)。不同刺激会诱导肝配蛋白 B 的酪氨酸磷酸化,包括结合 EphB 受体,激活 Src 激酶以及受 PDGF 和 FGF 的刺激 (6)。Tyr324 和 Tyr327 已被鉴定为肝配蛋白 B1 在体内的主要磷酸化位点 (7)。

  1. Wilkinson, D.G. (2000) Int Rev Cytol 196, 177-244.
  2. Klein, R. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 196-203.
  3. Dodelet, V.C. and Pasquale, E.B. (2000) Oncogene 19, 5614-9.
  4. Holder, N. and Klein, R. (1999) Development 126, 2033-44.
  5. Brückner, K. et al. (1997) Science 275, 1640-3.
  6. Palmer, A. et al. (2002) Mol Cell 9, 725-37.
  7. Kalo, M.S. et al. (2001) J Biol Chem 276, 38940-8.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DELFIA 为 PerkinElmer 公司的注册商标
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