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7522
HTScan® CDK2/CycA Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® CDK2/CycA Kinase Assay Kit #7522

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图 3. CDK2/CycA 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Rb (Ser807/811) Antibody #9308 检测 CDK2/CycA 激酶对底物肽 (#1144) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 CDK2/CycA 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 CDK2/CycA 激酶活性:使用 Phospho-(Ser807/811) Antibody #9308 检测 CDK2/CycA 激酶对底物肽 (#1144) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng CDK2/CycA、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. CDK2/CycA 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Rb (Ser807/811) Antibody #9308 检测 CDK2/CycA 激酶对底物肽 (#1144) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng CDK2/CycA 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. CDK2/CycA 激酶活性的时程:使用 Phospho-Rb (Ser807/811) Antibody #9308 检测 CDK2/CycA 激酶对底物肽 (#1144) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng CDK2/CycA 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射性同位素滤膜结合测定法中可检测 CDK2/CycA 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、2.5 µg/50 µl PEG20,000,底物:组蛋白 H1 1 µg /50 µl、重组 CDK2/CycA:50 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 CDK2/CycA 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 CDK2/CycA 激酶(以 GST 融合蛋白的形式提供)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸/苏氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-Rb (Ser807/811):GSK-CDK2:60kDa;GST-CycA:75 kDa。

背景

周期素和周期素依赖性激酶 (CDK) 是哺乳动物细胞周期的关键调节分子。这些复合体在周期素产生及其破坏、再定位、抑制/激活磷酸化、其它蛋白引起的再定位和修饰中发挥调节作用。每种周期素与一种或两种 CDK 有关,而多数 CDK 与一种或两种周期素有关 (1-3)。CDK1 会与周期素 A/B 形成复合体,并调节参与有丝分裂的细胞骨架蛋白的磷酸化。CDK2 和 CDK3 与周期素 E 形成可调节 G1-S 期转换的复合体,而 CDK2/CycA 复合体则调节 S 期进程 (4,5)。CDK4/CycD 和 CDK6/CycD 在 G1 早期通过促有丝分裂信号转导激活,并随着进入细胞周期的这一期逐渐聚集。CDK5 在有丝分裂后神经元中被激活,并在脑发育期间调节神经元迁移 (6)。CDK7/CycH 被认为会将转录和细胞周期联系在一起。CDK8/CycC 和 CDK9/CycT 与转录有关 (1,2)。CDK 的激酶活性受磷酸化和蛋白间相互作用的严格调控。CDK 激活需要结合某个特定周期素以及 T 环区域内某个保守苏氨酸残基的磷酸化。通过检测 CDK/周期素复合体对肽的磷酸化,发现 CDK 和周期素均在识别底物的过程中发挥作用。在被 CDK/周期素磷酸化的肽中,检测到共同序列 (S/T)PX(R/K)。

  1. Schang, L.M. (2002) J. Antimicrob. Chemother. 50, 779-792.
  2. Murray, A.W. (2004) Cell 116, 221-234.
  3. Chow, J.P. et al. (2003) J. Biol. Chem. 278, 40815-40828.
  4. Hofmann, F. and Livingston, D.M. (1996) Genes Dev. 10, 851-861.
  5. Golsteyn, R.M. (2005) Cancer Lett. 217, 129-138.
  6. Xie, Y. and Tsai, L.H. (2004) Cell Cycle 3, 108-110.
  7. Holmes, J.K. and Solomon, M.J. (1996) J Biol Chem 271, 25240-6.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DELFIA 为 PerkinElmer 公司的注册商标
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