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7755
HTScan® c-Kit Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® c-Kit Kinase Assay Kit #7755

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图 1. c-Kit 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 phospho-Tyrosine mAb (p-Tyr-100) #9411 检测 c-Kit 激酶对底物肽 #1364 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50ul 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 c-Kit 和 1.5uM 底物肽反应 30 分钟(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的注册商标)。

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图 2. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 c-Kit 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、2.5 µg/50 µl PEG20.000,底物:Tetra (LRRWSLG) 5 µg/50 µl,重组 c-Kit:200 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 c-Kit 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 c-Kit 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化酪氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-KDR (Tyr996):2,164 道尔顿;GST-c-Kit 激酶:75 KDa。

背景

c-Kit 是受体酪氨酸激酶亚族成员之一,这个亚族包括 PDGF、 CSF-1 和 FLT3/flk-2 受体 (1,2)。它在造血干细胞、肥大细胞、黑色素细胞和生殖细胞等多种细胞的激活和生长过程中起到重要作用 (3)。通过和配体干细胞因子 (SCF) 相结合,c-Kit 发生二聚化/寡聚化和自磷酸化。激活 c-Kit 能够募集含 SH2 的下游信号转导组分,包括 PLCγ、PI3K 激酶的 p85 亚基、 SHP2 和 CrkL,并使其酪氨酸磷酸化 (4)。导致 c-Kit 激酶功能减弱的分子损伤与各种发育异常相关 (5),而促使 c-Kit 组成型激活的突变则能导致肥大细胞增多症和胃肠道间质肿瘤 (6)。Tyr719 位于催化结构域的激酶插入片段中。在 Tyr719 位点磷酸化的 c-Kit 能够在体内体外与 PI3K 激酶的 p85 亚基结合 (7)。

  1. Martin, F.H. et al. (1990) Cell 63, 203-11.
  2. Yarden, Y. et al. (1987) EMBO J 6, 3341-51.
  3. Gommerman, J.L. et al. (1997) J Biol Chem 272, 30519-25.
  4. Sattler, M. et al. (1997) J Biol Chem 272, 10248-53.
  5. Nocka, K. et al. (1990) EMBO J 9, 1805-13.
  6. Hirota, S. et al. (1998) Science 279, 577-80.
  7. Blume-Jensen, P. et al. (2000) Nat Genet 24, 157-62.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DELFIA 为 PerkinElmer 公司的注册商标
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