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38145
VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #38145

引用 (1)
筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)

使用 VISTA (D5L5T) XP® 兔单克隆抗体 (Alexa Fluor® 647 偶联物)(红色)对小鼠结肠细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™488 Phalloidin #12935(绿色)标记。样品用 ProLong® Gold 含 DAPI 抗淬灭试剂#8961(DNA 荧光染料)封装。

购买 # 38145S
产品货号 规格 价格 库存
38145S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H M R
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 Alexa Fluor® 647 荧光染料,并在内部对小鼠组织进行了直接的免疫荧光分析检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 VISTA (D5L5T) XP® 兔单克隆抗体 #54979 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:100

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

特异性/敏感性

VISTA (D5L5T) XP® 兔单克隆抗体 (Alexa Fluor® 647 偶联物) 可检测 VISTA 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

通过采用与小鼠 VISTA 蛋白的 Val291 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

VISTA(T 细胞激活的 V 结构域 Ig 抑制蛋白)是一种阴性检查点调控蛋白,可调节 T 细胞激活和免疫应答。VISTA 包含一个 Ig 样 V 型结构域、一个跨膜结构域和一个胞内结构域,与 B7 和 CD28 家族成员具有序列相似性。虽然 VISTA 主要在骨髓细胞中表达,但它还可在 CD4+、CD8+ 和 FoxP3+ T 细胞中表达。因此,VISTA 既可以作为配体,也可作为受体 (1-3)。阻断 VISTA 会诱导 T 细胞激活和增殖,并使 EAE 模型中的疾病严重程度增加 (1)。此外,小鼠中 VISTA 的遗传缺失会导致 T 细胞自发激活和慢性炎症 (4,5)。在患有癌症的小鼠模型中,VISTA 的中和会强化 T 细胞增殖和效应子功能,加强肿瘤浸润,表明 VISTA 阻滞可作为肿瘤免疫治疗的一个有效策略 (6,7)。

  1. Wang, L. et al. (2011) J Exp Med 208, 577-92.
  2. Flies, D.B. et al. (2011) J Immunol 187, 1537-41.
  3. Lines, J.L. et al. (2014) Cancer Res 74, 1924-32.
  4. Wang, L. et al. (2014) Proc Natl Acad Sci U S A 111, 14846-51.
  5. Liu, J. et al. (2015) Proc Natl Acad Sci U S A 112, 6682-7.
  6. Le Mercier, I. et al. (2014) Cancer Res 74, 1933-44.
  7. Lines, J.L. et al. (2014) Cancer Immunol Res 2, 510-7.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
DyLight 是 Thermo Fisher Scientific, Inc. 及其子公司的注册商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。
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