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47009
TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #47009

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筛选器:
  1. F
Flow Cytometry Image 1: TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)
使用 TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8760(虚线)对 U-937 细胞(蓝色,阴性)和 HDLM-2 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。
To Purchase # 47009S
目录# 规格 价格 库存
47009S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

这种 Cell Signaling Technology 抗体偶联于 Alexa Fluor® 594 荧光染料,并针对人细胞中直接流式细胞分析接受内部检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® 兔单克隆抗体 #25114 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

特异性/灵敏度

TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® 兔单克隆抗体 (Alexa Fluor® 594 偶联物) 可检测 TNFRSF8/CD30 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

使用对人 TNFRSF8/CD30 蛋白的细胞外结构域具有特异性的重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

TNFRSF8/CD30 是一种 I 型跨膜糖蛋白,它是 TNFR 超家族成员。CD30 以前体蛋白形式合成,在将其作为 120-kda 的跨膜蛋白嵌入到质膜之前,需要经过广泛的翻译后修饰 (1,2)。CD30 的表达在活化 T 细胞中被上调,因此在相互作用过程中可触发协同刺激的信号转导通路 (3,4)。虽然它的表达通常局限于活化 T 细胞和 B 细胞亚群中,但 CD30表达在血液恶性肿瘤,如霍奇金淋巴瘤 (HL)、间变性大细胞淋巴瘤 (ALCL) 和成人 T 细胞白血病中高度上调,使其成为治疗干预的一个有吸引力的靶标 (5,6)。研究提示,在某些疾病背景下,CD30 通过募集 TRAF2 和 TRAF5 接头蛋白来驱动 NF-κB 活化、异常细胞生长和细胞因子生成 (7-9)。CD30 信号转导也受其胞外结构域的 TACE 依赖的蛋白溶解性裂解的调控,从而导致 CD30L 依赖的 CD30 + 细胞的活化减少 (10, 11)。
  1. Froese, P. et al. (1987) J Immunol 139, 2081-7.
  2. Nawrocki, J.F. et al. (1988) J Immunol 141, 672-80.
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  9. Horie, R. et al. (2004) Cancer Cell 5, 353-64.
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  11. Gruss, H.J. et al. (1997) Immunol Today 18, 156-63.

通路与蛋白质

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
KARPAS 细胞系来源:剑桥大学 Abraham Karpas 博士。
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