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98059
RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb (PE Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb (PE Conjugate) #98059

引用 (18)
筛选器:
  1. F
Flow Cytometry Image 1: RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb (PE Conjugate)
使用 RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb (PE Conjugate) 对 LNCaP(蓝色)和 Saos-2(绿色)细胞进行流式细胞分析。
购买 # 98059S
产品货号 规格 价格 库存
98059S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H M R
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Vir- Virus
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人体细胞进行了直接的流式细胞术分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb #12556 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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针对直接偶联抗体的甲醇透化实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS):要制备 1 L 1X PBS:添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 4% 甲醛,不含甲醇 (#47746)
  3. 100% 甲醇 (#13604):用前冷却
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表

B. 固定

:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。

注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛的密度重悬细胞。混匀以解离沉淀物,并阻止个别细胞出现交联。
  3. 在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。继续进行通透步骤。
    1. 或者,细胞可放在 1X PBS 中保存在 4°C 下过夜。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上通透至少 10 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液或 1X PBS 进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上进行分析。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:407

特异性/敏感性

RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb (PE Conjugate) 可识别内源水平的 RUNX2 总蛋白。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

使用与人 RUNX2 蛋白中 Ala273 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Runt-相关转录因子 2 (RUNX2) 是转录因子 RUNX 家族的一员。它与成骨细胞分化和骨骼形态发生有关。RUNX2 可通过结合增强子或启动子的核心位点来调节骨桥蛋白、骨唾液蛋白和骨钙蛋白等不同基因的转录 (1-3)。RUNX2 对成骨细胞的成熟以及膜内和软骨内骨化都非常关键。相应 RUNX2 基因突变与骨骼发育障碍颅骨锁骨发育不良 (CCD) 有关 (4-6)。RUNX2 还在前列腺癌和乳腺癌等各种人癌细胞中异常表达。它在前列腺癌和乳腺癌细胞的迁移、浸润和骨转移中发挥重要作用 (7-10)。
  1. Viereck, V. et al. (2002) J Cell Biochem 86, 348-56.
  2. Willis, D.M. et al. (2002) J Biol Chem 277, 37280-91.
  3. Tu, Q. et al. (2008) J Cell Physiol 217, 40-7.
  4. Quack, I. et al. (1999) Am J Hum Genet 65, 1268-78.
  5. Cardoso, B.M. et al. (2010) Clin Dysmorphol 19, 150-2.
  6. Han, M.S. et al. (2010) J Cell Biochem 110, 97-103.
  7. Akech, J. et al. (2010) Oncogene 29, 811-21.
  8. van der Deen, M. et al. (2010) J Cell Biochem 109, 828-37.
  9. Barnes, G.L. et al. (2003) Cancer Res 63, 2631-7.
  10. Barnes, G.L. et al. (2004) Cancer Res 64, 4506-13.

通路和蛋白

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