反应性 | M |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 647荧光染料,并且对小鼠细胞进行了直接的流式细胞分析内部识别。This antibody is expected to exhibit the same species cross-reactivity as the unconjugated Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) (E3U1H) Rabbit mAb #17366.
应用 | 稀释度 |
---|---|
流式细胞术 | 1:50 |
保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。不要分装抗体,避光保存,切勿冷冻。
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。
注:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。
注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。
注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。
注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布于 2009 年 7 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) (E3U1H) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) recognizes endogenous levels of p85/p55 protein only when phosphorylated at Tyr467/Tyr199 (Tyr458/Tyr199 in mouse).
小鼠
人
使用与人 p85α 蛋白中 Tyr467(相当于小鼠 Tyr458)周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
磷酸肌醇 3-激酶 (PI3K) 通过磷酸化磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸 (PIP) 和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)催化磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的生成。生长因子和激素会引发该磷酸化事件,这又反过来调控细胞生长、细胞周期进入、细胞迁移和细胞存活 (1)。PTEN 逆转了这一过程。研究表明,PI3K 信号通路在 PTEN 功能丧失的人类癌症中组成性激活(2)。PI3Ks由一个催化亚基(p110)和一个调节亚基构成。已经分离得到催化亚基 (p110α、p110β、p110γ 和 p110δ) 的多个同工型,与 p110α、p110β 和 p110δ 连接的调控亚基是 p85α 和 p85β (3)。相反,p110γ 与 p101 调控亚基连接,而 p101 调控亚基与 p85 无关。此外,p110γ 被异二聚体 G 蛋白的 βγ 亚基激活 (4)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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