反应性 | H M R Mk |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人体细胞进行了直接的流式细胞术分析内部检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb #2697 相同。
应用 | 稀释度 |
---|---|
流式细胞术 | 1:50 |
保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。
注:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。
注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。
注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。
注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布于 2009 年 7 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
仅当 IKKα 在 Ser176/180 位点被磷酸化以及 IKKβ 在 Ser177/181 位点被磷酸化时,Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb (PE Conjugate) 才能检测出 IKKα 和 IKKβ。
人, 小鼠, 大鼠, 猴
牛
使用与人 IKKα 蛋白中 Ser176/180 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
NF-κB/Rel 转录因子以非活性状态存在于细胞质中,并复合了抑制性 IκB 蛋白 (1-3)。大多数物质都是通过基于 IκB 诱导磷酸化、蛋白酶调节降解的共同通路激活 NF-κB (3-7)。本通路的主要调节步骤包括激活高分子量 IκB 激酶 (IKK) 复合体,通常情况下可通过三种紧密结合的 IKK 亚基发挥其催化作用。IKKα 和 IKKβ 可作为激酶的催化亚基, IKKγ 可作为调节亚基 (8,9)。IKK 的激活取决于 IKKβ 激活环中 Ser177 和 Ser181(IKKα 中的 Ser176 和 Ser180)位点的磷酸化,导致其构象发生变化,从而激活激酶 (10-13)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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