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52821
Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #52821

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筛选器:
  1. IF
  2. F
Immunofluorescence Image 1: Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
使用 Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(绿色)对未经处理(左图)或已经过抗人 IgM(12 μg/mL,10 分钟;右图)处理的 Ramos 细胞(阳性;上图)和 Jurkat 细胞(阴性;下图)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Flow Cytometry Image 1: Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
使用 Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 对未经处理(蓝色)或已经抗人 IgM(12 μg/ml,10分钟;绿色)处理的 Ramos 细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 52821S
目录# 规格 价格 库存
52821S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Vir- Virus
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 488荧光染料,并对人细胞进行了直接的免疫荧光和流式细胞分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联 Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb #14732 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:50
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:182

针对直接偶联抗体的甲醇透化实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS):要制备 1 L 1X PBS:添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 4% 甲醛,不含甲醇 (#47746)
  3. 100% 甲醇 (#13604):用前冷却
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表

B. 固定

:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。

注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛的密度重悬细胞。混匀以解离沉淀物,并阻止个别细胞出现交联。
  3. 在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。继续进行通透步骤。
    1. 或者,细胞可放在 1X PBS 中保存在 4°C 下过夜。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上通透至少 10 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液或 1X PBS 进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上进行分析。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:407

特异性/敏感性

仅当人 CD79A 蛋白在 Tyr188 位点被磷酸化时,Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 才能识别出内源水平的人 CD79A 蛋白。它响应小鼠 CD79A 蛋白的 Tyr182。

物种反应性:

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

小鼠

来源/纯化

使用与人 CD79A 蛋白的 Tyr188 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。此磷酸肽序列与小鼠 CD79A 蛋白的 Tyr182 周围区域相同。

背景

B 细胞表面上存在的抗原受体含有由 CD79A 和 CD79B (分别又称作 Ig α 和 Ig β)组成的异二聚信号转导组分 (1,2)。这种受体复合体的存在是 B 细胞发育和功能必需的 (3)。总之,这两种蛋白质和相关的 B 细胞受体 (BCR) 在抗原结合后启动胞内信号转导 (4,5)。存在于 CD79A 胞内区中的基于免疫受体酪氨酸的活化基序 (ITAM) 似乎对其功能重要 (6)。抗原结合在 CD79A 和 CD79B 异二聚体的形成和受体相关激酶的后续激活之前发生 (7)。研究已经证实 CD79A 是 B 系淋巴母细胞性白血病的标记物 (8)。此外,研究者已经发现, CD79A (MB1) 基因中的突变与一些慢性 B 细胞淋巴细胞白血病病例中异常低水平的有功能 B 细胞受体相关 (9)。
  1. van Noesel, C.J. et al. (1991) J Immunol 146, 3881-8.
  2. Minegishi, Y. et al. (1999) J Clin Invest 104, 1115-21.
  3. Yu, L.M. and Chang, T.W. (1992) J Immunol 148, 633-7.
  4. Storch, B. et al. (2007) Eur J Immunol 37, 252-60.
  5. Mason, D.Y. et al. (1995) Blood 86, 1453-9.
  6. Luisiri, P. et al. (1996) J Biol Chem 271, 5158-63.
  7. Pike, K.A. et al. (2004) J Immunol 172, 2210-8.
  8. Astsaturov, I.A. et al. (1996) Leukemia 10, 769-73.
  9. Vuillier, F. et al. (2005) Blood 105, 2933-40.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料接合物已获得 Life Technologies Corporation 的许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列和高内涵筛选 (HCS) 合并使用。
提供的本品取得了 Life Technologies Corporation 的知识产权许可。本产品的转让条件为买方仅可将购买的产品用于由买方开展的研究,不包括合同研究或任何收取费用的服务研究,买方不得 (1) 将本产品或其组分用于以下目的:(a) 用于诊断、诊疗或预防的目的;(b) 用于检测、分析或筛选服务或获得信息,以按检测收取报酬;或 (c) 用于制造或质量保证或质量控制,和/或 (2) 销售或转让本产品或其组分用于转售,无论是否转售供研究使用。如需了解有关购买本品用于除上述目的之外目的的许可信息,请联系 Life Technologies Corporation(地址:5791Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 USA)或 [电子邮件受保护]
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